[发明专利]Sj12多肽及其在制备抗凝血药物中的应用

说明书

本发明公开了一种来源于日本血吸虫的Sj12多肽，所述多肽对外源性凝血系统和凝血共同途径均无影响，但是能够干扰内源性凝血系统，使凝血时间延长超过正常检测范围10秒以上，起到了抑制血液凝固的作用，其凝血活性优于现有技术中的抗凝多肽，具有重要的抗凝、抗血栓药物开发应用价值。

技术领域

本发明属于生物医药医疗领域，具体涉及来源于日本血吸虫的Sj12多肽，及其在制备抗凝血药物中的应用。

背景技术

血液能够在人体内正常循环流动，除了心脏正常工作之外，还需要血液流经之处始终保持畅通状态。为了维持血液在血管系统的无障碍运行，血管内皮必须完好无损；机体的凝血、抗凝和纤溶系统必须处于平衡状态，这些对机体发挥正常生理功能起着重要作用。当机体的凝血、抗凝或是纤溶系统功能异常时，凝血与抗凝血的平衡被打破，随之而来的便是出血或是血栓形成的发生。长期少量的出血机体可出现贫血症状；急性大量出血机体可出现休克症状，引发多器官功能衰竭，甚至是造成死亡。血栓形成可引起相应组织和器官缺血、缺氧、坏死(动脉血栓)以及淤血、水肿(静脉血栓)，这将严重的威胁着人们的生命健康。动脉血栓形成是造成90％以上的心肌梗死，80％脑卒中的主要原因，动脉栓塞性心脑血管疾病是导致人类死亡首要因素。静脉血栓栓塞(VTE),包括深静脉血栓(DVT)和肺栓塞(PE)，是继心梗和中风后位列第3位的心血管相关性疾病的死亡原因。全球每年确诊VTE患者约数百万人，在美国，据不完全统计每年发生VTE超过90万例，其中约30万例死于肺栓塞。死于肺栓塞的人数是每年死于肺癌、交通意外和AIDS总人数的5倍还要多，政府每年要花费5.8-7.8亿美元治疗这种疾病。在欧洲，每年发生112万例VTE，PTE54.3万例，是VTE相关死亡猝死的主要原因之一，约占院内死亡的5％-10％^[5]。在我国，1997年-2008年，24个地区60多家三甲医院针对PTE的统计数据显示，住院患者PE的发生率逐年上升，至2008年约为0.1％。另外，2006年-2010年28个省自治区205家医院针对特定人群，包括重症监护病房(ICU)、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、肺癌、老年内科住院患者以及妇产科大手术患者，进行了VTE的流行病学调查，结果显示其发病率分别为27％，9.7％，11.5％，9.7％。由此可见，在中国人群中，VTE的发病率甚至与欧美相当，该病在中国乃至亚洲被严重低估。因此，血液凝固异常导致栓塞性疾病，是危害人类健康的主要杀手。

德国的Rudolf L.K.Virchow 1856年提出了血栓形成三因素(Virchow三因素)即血液流速、血液成分以及血管损伤，指出这些因素彼此相互作用，导致了血管内血栓的形成，至今仍然是血栓形成机制的经典理论。据此，临床上治疗血栓栓塞性疾病药物，分为三类：即抗血小板药、抗凝血药和纤维蛋白溶解药。

2015年，澳大利亚学者SL Ranasinghe等人在日本血吸虫cDNA中发现了第一个抗凝多肽SjKI-1，但是其抗凝效果不尽如人意。

发明内容

本发明中，通过对血吸虫蛋白数据库的筛选，通过结构生物学和生物信息学的方式，获取血吸虫蛋白序列；采用基因工程技术将日本血吸虫多肽Sj12克隆、表达、纯化，并基于APTT、PT和TT筛选平台，系统的评价了日本血吸虫多肽Sj12资源的抗凝潜能，为新型抗凝血药物制备提供了新的抗凝多肽资源。

本发明目的通过以下技术方案来实现：

本发明提供了一种多肽Sj12，所述多肽包含SEO ID NO.1所示氨基酸序列。

本发明提供了一种分离的核酸分子，所述核酸分子编码多肽Sj12。进一步的，所述核酸分子包含SEO ID NO.2所示核苷酸序列。

本发明提供了一种载体，所述载体包含编码多肽Sj12的核酸分子。

本发明提供了一种非人细胞，所述细胞包含所述多肽Sj12、和/或编码多肽Sj12的核酸分子。

本发明提供了一组引物，所述引物组包含3对引物，分别为：