[发明专利]一种溶酪大球菌间接血凝抗体检测试剂盒及其制备和应用

说明书

本发明公开了一种溶酪大球菌间接血凝抗体检测试剂盒及其制备和应用。所述试剂盒中包括：(1)溶酪大球菌间接血凝抗原；(2)标准阳性血清；(3)标准阴性血清；(4)稀释液。本发明提供的一种溶酪大球菌间接血凝抗体检测试剂盒及其制备和应用，其有益效果包括以下方面：试剂盒操作简单方便，适合在各基层兽医有关单位以及养殖场广泛推广使用；本发明中的试剂盒在检测样品时只需要使用几种简单耗材以及温箱，即使在条件比较简陋的养殖场也可以使用；结果判定直观，眼观即可；操作人员不需要专业知识，不必接受专业培训，只参照说明书就可进行检测；成本低廉，经济实惠，使用者均可接受。

技术领域

本发明属于检测试剂盒领域，具体涉及一种溶酪大球菌间接血凝抗体检测试剂盒及其制备和应用。

背景技术

溶酪大球菌(Macrococcus caseolyticus，MCSD)属于巨球菌属，该属包括7个菌种，溶酪大球菌是其中的代表菌种。该菌可特异性的从动物皮和动物类食品中分离到，比如牛乳、生牛肉、鸡肉、火腿等，我国传统肉制品广式腊肠中也能分离到。该菌可引起鱼发病，已从牙鲆、鲭鱼、加州鲈等鱼体内分离到，给水产养殖带来了危害。另外，溶酪大球菌还可以使犬发病，表现鼻炎的症状。该菌还携带耐甲氧西林的SCCmec原件(mecB-carrying SCCmecelement)，表现对青霉素类药物高度耐药。本研究团队首次从鸭体内分离到多株溶酪大球菌，并且所分离到的菌株均对环丙沙星高度耐药，提示在对溶酪大球菌导致的临床动物的治疗中环丙沙星无效。

目前国内外对溶酪大球菌的研究报道甚少，GenBank基因库中仅有一株溶酪大球菌的全序列，对于溶酪大球菌的分子生物学检测技术报道的非常少，对于溶酪大球菌的血清抗体检测技术在国内外均未见报道。鉴于此，有必要开发一种可检测溶酪大球菌血清抗体的免疫学技术，用来对溶酪大球菌的感染状况进行调查。

发明内容

针对上述问题和现有技术的不足，本发明提供一种溶酪大球菌间接血凝抗体检测技术，用来对溶酪大球菌的感染状况进行检测，另外可对鸭体内溶酪大球菌开展流行病学调查。

为了实现上述目的，本发明提供了一种溶酪大球菌(Macrococcus caseolyticus，MCSD)间接血凝抗体检测试剂盒，所述的试剂盒包括：

(1)溶酪大球菌间接血凝抗原；

(2)标准阳性血清；

(3)标准阴性血清；

(4)稀释液。

进一步地，上述用来制备溶酪大球菌(Macrococcus caseolyticus，MCSD)间接血凝抗原的溶酪大球菌菌株为来源于鸭的田间分离株，于2018年03月11日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏地址：中国.武汉.武汉大学，菌株保藏编号为CCTCC NO:M2018116，保藏名称：溶酪大球菌MCSD(Macrococcus caseolyticus，MCSD)。

进一步地，上述的溶酪大球菌(Macrococcus caseolyticus，MCSD)间接血凝抗原是将溶酪大球菌CCTCC M 2018116株进行增菌培养后，进行超声破碎，再离心取上清后，作为抗原致敏鞣酸处理过的绵羊红细胞得到的。

进一步地，上述的溶酪大球菌(Macrococcus caseolyticus，MCSD)间接血凝抗原的制备方法，包括以下步骤：

(1)静脉采集绵羊红细胞，与灭菌阿氏液混匀并保存，在4℃静置3～5天，使红细胞充分沉淀，然后对绵羊红细胞进行洗涤、戊二醛固定和质量体积百分比为1/40000的鞣酸处理，所用的溶液均为浓度0.1M，pH7.2的磷酸盐缓冲液，最后将制备好的绵羊红细胞用浓度0.1M，pH7.2的磷酸盐缓冲液悬浮至体积百分比为5％的浓度，得到绵羊红细胞悬液；