[发明专利]一种菠萝染色体二级结构的样品制备方法

权利要求书

1.一种菠萝染色体二级结构的样品制备方法，其特征在于：所述方法包括如下步骤：

（1）溶液的配制：

核裂解液含有：0.25M蔗糖，pH6.8 PIPES 15mM，5mM MgCl₂，60mM KCl，15mM NaCl，1mMCaCl₂，0.9wt.%Triton X-100，用前加100ul cocktail和1mM PMSF；

酶解缓冲液含有：10wt.%蔗糖，pH 7.5 50mM Tris-HCl，4mM MgCl₂，1mM CaCl₂；

（2）材料的获得：

取菠萝嫩的叶片研磨达成细粉末状；

（3）样品处理

将研磨好的菠萝叶片粉末转移至50ml离心管，加入核裂解液，至40ml；4℃ 处理30分钟；

（4）提取细胞核

将处理好的样品分两管，4℃，4000转/min，离心20分钟；去上清，1ml核核裂解液重悬沉淀，转移至1.5ml离心管，4℃，4000转/min，离心20分钟；可再洗一次沉淀，直至沉淀颜色较白；

（5）酶切

沉淀用1ml的酶解缓冲液悬浮，加0.1UM Nase核酸酶，37℃反应10分钟，加20μl 的0.5M、pH 8.0 EDTA终止反应；

（6）电泳回收条带

12000g 离心10分钟，取上清，分两管，加入等体积的酚：氯仿抽提一次，酚：氯仿体积比为1:1，然后加入2倍体积乙醇在-20℃下沉淀DNA 20分钟；12000g离心10分钟，取沉淀，75%乙醇洗一次；电泳并回收200bp DNA条带；

（7）准备样品送测序或者PCR

回收试剂盒回收目的条带后，进行PCR反应，或者建库后送测序，即获得菠萝染色体二级结构。