[发明专利]快速检测牛白血病前病毒的RPA引物及试剂和试剂盒

说明书

本发明公开了一种快速检测牛白血病前病毒的RPA引物及试剂和试剂盒。本发明的RPA引物，其上游引物的DNA序列为<210>2，下游引物的DNA序列为<210>3。本发明釆用重组酶聚合酶扩增‑免疫侧流层析检测技术(RPA‑LFA)技术建立了BLV感染的可视化快速检测体系，通过对BLV核酸样品的检测，证实筛选的BLV RPA可视化检测引物具有很高的特异性和敏感性。与现有技术相比，本发明为牛BLV感染的分子诊断提供了一个快速、简便、准确的检测试剂，特别是具有对仪器设备要求低，只需要一个恒温水浴锅，检测速度快，约40min即可，检测结果可视化，直接用肉眼即可观察等优点。

技术领域

本发明属生物技术领域，具体涉及一种可视化检测牛白血病前病毒核酸的RPA引物及其应用，特别是一种快速检测牛白血病前病毒的RPA引物及试剂和试剂盒。

技术背景

牛白血病(Bovine leukaemia，BL)又称地方流行性牛白血病，是由牛白血病病毒(Bovine leukaemia virus，BLV)引起牛的一种慢性肿瘤性疾病，其特征为淋巴样细胞恶性增生、进行性恶病质和较高的死亡率。1878年，德国首先发现了该病，直到1969年美国Miller等人从病牛中分离到该病毒。随后，该病在丹麦、日本、法国、韩国、俄罗斯、意大利、智利、波兰、伊朗、泰国、澳大利亚、比利时、乌拉圭等国家和地区陆续被发现，部分地区感染率可达12％。目前，该病已几乎遍及全世界所有的养牛国家，世界动物卫生组织(OIE)已将其列为B类动物传染病，我国将其列为二类传染病。

1974年，在我国上海首次发现该病。1990年后，在我国安徽、江苏、陕西、北京、甘肃和江西等地区都出现了该病，而且有逐渐扩大蔓延的趋势。吴玉石等(2008)用研制的BLVregp51-ELISA试剂盒对采集于山东济南164份奶牛血清和澳大利亚进口奶牛398份血清进行了检测，血清抗体阳性率分别6.10％和4.77％。李凯航等(2011)对上海市规模化养牛场牛群牛白血病进行了血清学调查，血清阳性率为11.3～32.0％。师庆杰等(2014)用美国IDEXX公司生产的BLVgp51蛋白单克隆抗体阻断ELISA检测试剂盒对黑龙江省内8个地区的12个规模化奶牛场进行牛白血病血清学调查，血清阳性率为9.76％。曹向英等(2017)应用ELISA法对上海市松江区2个牛场进行了牛白血病血清学监测，血清阳性率为30.0％，证实上海地区BLV感染非常普遍。马剑钢等(2017)采用酶联免疫吸附试验(ELISA)对西北地区的1584份牦牛血清样品进行了检测，结果牦牛BLV血清抗体阳性率为21.09％。尽管牛白血病的病死率不高，但是牛感染BLV后会出现消瘦、贫血、体表的多个部位淋巴结肿胀。同时，BLV感染后引起的卵巢肿瘤还会导致不孕，影响奶牛的生产水平和繁殖性能，成为危害奶牛养殖业的重要传染病之一。