[发明专利]一种液相色谱检测血清中组织蛋白酶G的方法

权利要求书

1.一种液相色谱检测血清中组织蛋白酶G的方法，其特征在于，包括如下步骤：

1）供试品的制备：将血样于3000~5000r/min离心10 ~20min取血清，加入碘乙酰胺与NH₄HCO₃混和，避光 45 min充分混匀，依次用氯化钠溶液、乙腈洗脱，收集洗脱液；

2）对照品的制备：取组织蛋白酶G标准品，用流动相溶解配置成溶液；

3）测定：精密量取对照品溶液及供试品溶液各10~20μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算血清中组织蛋白酶G的含量；

其中，色谱条件为：色谱柱以阳离子交换树脂为填充剂；以乙腈和缓冲盐溶液的混合溶液为流动相；流动相的流速为0.8 ～ 1.2ml/min ；检测波长为190 ～ 210nm ；柱温为20～ 50℃。

2.根据权利要求1所述一种液相色谱检测血清中组织蛋白酶G的方法，其特征在于，步骤1）中碘乙酰胺与NH₄HCO₃的质量比为1： 10~20。

3.根据权利要求1所述一种液相色谱检测血清中组织蛋白酶G的方法，其特征在于，步骤1）中所述氯化钠溶液浓度为0.5~1.5mol/L。

4.根据权利要求1所述一种液相色谱检测血清中组织蛋白酶G的方法，其特征在于，步骤2）中所述流动相为乙腈和缓冲盐溶液的混合溶液，所述的乙腈和缓冲盐溶液的体积比例为75:25～85:15。

5.根据权利要求1所述一种液相色谱检测血清中组织蛋白酶G的方法，其特征在于，所述阳离子交换树脂色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C18 液相色谱柱。

6.根据权利要求1所述一种液相色谱检测血清中组织蛋白酶G的方法，其特征在于，所述外标法以峰面积计算公式为供试品标示含量（%）=（供试品溶液峰面积/ 标准品溶液峰面积）×100%。

7.根据权利要求1所述一种液相色谱检测血清中组织蛋白酶G的方法，其特征在于，所述缓冲盐溶液由3 .728gKCl和7mlHCl溶解于1000ml水中制得。