[发明专利]转录因子CEBPα作为Kiss1启动子区的转录因子的应用

说明书

本发明公开一种转录因子CEBPα作为Kiss1启动子区的转录因子的应用，属于基因工程和细胞工程技术领域。本发明以转录因子CEBPα为研究对象，采用了生物信息学预测Kiss1启动子区潜在结合的转录因子CEBPα，研究该转录因子CEBPα在卵巢颗粒细胞中对Kiss1启动子区活性的影响，来达到该基因在卵巢颗粒细胞中的表达调控研究。本发明首次证实通过在猪卵巢颗粒细胞中转录因子CEBPα对Kiss1基因的表达调控和在卵巢颗粒细胞中的功能进行研究。本研究实验内容丰富，结果齐全、准确。

技术领域

本发明属于基因工程和细胞工程技术领域，具体涉及母猪卵巢卵泡发育过程中，转录因子CEBPα作为Kiss1启动子区的转录因子的应用。

背景技术

卵巢卵泡的生长发育状态直接决定了母猪繁殖性能的高低，颗粒细胞功能影响着卵泡的生长与闭锁，研究发现，Kiss1在卵巢组织中可以促进卵泡的发育，影响颗粒细胞的功能。

卵巢是雌性动物的生殖器官，可以为雌性动物提供性激素，为卵子的成熟提供场所，研究表明，下丘脑-垂体-性腺轴分泌的FSH和LH可以作用于卵巢，促进卵巢卵泡和卵母细胞的发育，FSH能够促进卵巢的生长，增加卵巢的质量，LH能够促进卵泡和卵母细胞的发育，促进排卵；两者还能促进卵巢分泌孕酮和雌二醇，从而促使卵巢周期性排卵，通过负反馈调节抑制GnRH、FSH和LH的释放，使GnRH、FSH和LH随着卵巢内雌激素的水平变化而呈现周期性的变化，从而维持和调节生殖发育。而在卵巢卵泡的发育过程中，扁平状的卵巢颗粒细胞会变成逐渐立方形，标志着原始卵泡开始发育为初级卵泡，随着卵巢颗粒细胞的层数的增多，颗粒细胞开始分化，这些变化在原始卵泡的休眠与激活，卵子的成熟，卵泡的闭锁，卵母细胞的生长等过程中都起着重要的作用。研究发现，Kiss1的等位基因突变，大鼠的卵泡数量明显减少，卵巢卵泡发育减慢，在卵巢卵泡发育的晚期，随着雌激素的增加，在猪和羊的下丘脑检测到Kiss1的mRNA也随之增加，但是早于GnRH的增加，有关小鼠的研究表明，kisspeptin可能直接作用于卵巢，参与卵巢早衰的形成，研究发现，Kiss1的突变或缺失可以导致人类或者小鼠出现低促性腺激素性性腺功能衰退，具体表现为雌性小鼠卵巢体积很小，卵泡发育不正常，雄性小鼠睾丸小，精子发育不良。

CEBPs(CCAAT enhancer-binding proteins，CEBPs)是一类转录因子家族CCAAT增强子结合蛋白，可以特异性结合到DNA的增强子区域，广泛参与到细胞的增殖、胚胎发育、机体能量代谢、细胞凋亡和免疫反应等，其由CEBPα、CEBPβ、CEBPγ、CEBPδ、CEBPε和CEBPζ六个成员组成。当CEBPs作为负调节因子发挥作用的时候，必须存在以下三个功能区，一、稳定区(SR)，位于N末端，使蛋白结构更加稳定；二、激活区(AD)，有AD1和AD2两个区域，彼此相互独立，相互促进；三、位于C末端的DNA结一、稳定区(SR)，位于N末端，使蛋白结构更加稳定；二、激活区(AD)，有AD1和AD2两个区域，彼此相互独立，相互促进；三、位于C末端的DNA结合区，含有bZIL蛋白结构，这个结构域可以与亮氨酸拉链区紧密相连，可以特异性的结合DNA序列，含有N-末端含有酸性激活区，可以直接与DNA结合，也可以识别顺式作用元件。

CEBPα对主要通过两种方式调控基因的表达：激活抑制基因的转录，在细胞的信号传导、细胞分化、细胞增殖、应激反应、能量代谢及肿瘤生成等方面发挥着很重要的作用。研究表明，敲除小鼠的CEBPα基因，小鼠的肺和肝的细胞都不能正常增殖，CEBPα突变小鼠显示骨髓前导子增加，小鼠肾脏或骨髓B细胞CEBPα或者CEBPβ的表达导致一些B细胞重编程为骨髓家系。

发明内容

为了克服现有技术的缺点与不足，本发明的首要目的在于提供一种转录因子CEBPα作为Kiss1启动子区的转录因子的应用。

本发明的另一目的在于提供所述的转录因子CEBPα在抑制Kiss1基因表达中的应用。

本发明的另一目的在于提供所述的转录因子CEBPα在抑制卵巢颗粒细胞中E2生成的应用。