[发明专利]一种检测H2O2的荧光探针及其制备方法

说明书

本发明属于过氧化氢分析检测技术领域，具体涉及一种检测H₂O₂的荧光探针及其制备方法，其结构式如图所示，包括罗丹明衍生物和磷脂，一定量的罗丹明内酰胺与磷脂在一定条件下发生缩合反应得到目标化合物，合成过程原料简单易得、反应条件温和、操作简单，所得检测H₂O₂的荧光探针具有水溶性好、灵敏度高、光稳定性好、荧光量子产率高、波长长等优点，而且反应后的副产物不会对生物体产生危害，可广泛应用于生物细胞及药物合成。

技术领域

本发明属于过氧化氢分析检测技术领域，具体涉及一种检测H₂O₂的荧光探针及其制备方法。

背景技术

过氧化氢是一种重要的活性氧物质，在生物机体活动和外界环境中有着极其重要的应用。在自然环境中，过氧化氢可以用来净化自来水，在生物进行生命活动的时候，过氧化氢在细胞代谢过程中发挥着免疫标志的功能。生物新陈代谢过程中产生的过氧化氢(H₂O₂)是生命活动所必需的，过氧化氢在生理过程中有着重要作用。最近几年的研究表明，过氧化氢可以以信号分子的角色对生理和病理过程进行调节，与细胞的增殖分化以及迁移过程息息相关，除此之外，过氧化氢在很多病理过程中例如炎症、机体防御等方面也发挥着重要作用。但是很多疾病也是由于过量的过氧化氢而引起的，例如：癌症、阿尔察默病等疾病。因此实时定量的检测生物机体和外界环境中的过氧化氢具有非常重要的意义。

针对过氧化氢的检测，现已有多种方式，包括氧化还原敏感荧光蛋白、纳米管、超极化、超声、质谱、PET、化学发光，以及过氧化氢反应性小分子荧光探针。值得注意的是，小分子荧光探针由于具有高敏感、对组织无损伤等特性，越来越引起研究人员的关注。然而，现有的市售的荧光探针，如二氯二氟荧光素、二氢罗丹明等，对ROS缺乏特异性。

为解决这个问题，Chang等(JAmChemSoc,2004,126:15392-15393.)报道了以荧光素为发光团，以硼酸酯基团作为荧光反应位点的荧光素类的双硼酸酯荧光探针，该探针对过氧化氢的响应比其他活性氧化合物高500倍以上，可以检测到人体胚肾细胞内微摩尔级的过氧化氢，反应机制如下。然而，芳基硼酸酯类探针对过氧化亚硝基阴离子(ONOO-)的反应活性高于过氧化氢，在生物体内脱靶反应严重，这一缺点限制了其广泛应用。同时，该类探针反应后的副产物硼酸的生物学效应未知。

因此，为了解决荧光探针对ROS缺乏特异性，水溶性差等问题，设计合成对过氧化氢具有高度特异性，即选择性好、灵敏度高、抗干扰能力强，同时，其反应后的产物可以对过氧化氢造成的氧化应激损伤起到一定的保护性效果的新型荧光探针具有重要的意义。

发明内容

为了解决荧光探针对ROS缺乏特异性，水溶性差等问题，本发明一种检测H₂O₂的荧光探针及其制备方法。

一种检测H₂O₂的荧光探针，其结构式如图1所示。

进一步的，检测H₂O₂的荧光探针结构式中基团R1，R2为烷基基团。

进一步的，检测H₂O₂的荧光探针结构式中n为0，2，3，...n。

进一步的，制备上述的检测H₂O₂的荧光探针，其合成方法如下：

合成罗丹明B内酰胺中间体：称取2-3g罗丹明染料，将其溶于有机溶剂，接着将胺类化合物溶液逐滴加入到罗丹明溶液中，加热至50-60℃，回流反应2-7h后得到罗丹明B内酰胺中间体；