[发明专利]破伤风免疫球蛋白血样筛选试剂盒、制备方法及使用方法

权利要求书

1.一种破伤风免疫球蛋白血样筛选试剂盒，其特征在于，试剂盒包括破伤风类毒素灭活精纯抗原包被的酶标板、抗破伤风杆菌抗体、酶标记物和标准品溶液；所述酶标板上包被的破伤风类毒素灭活精纯抗原的蛋白质浓度为0.5-3.0ug/ml；所述酶标记物包括稳定剂A、生物防腐剂和辣根过氧化物酶标记的鼠抗人IgG单克隆抗体，所述鼠抗人IgG单克隆抗体的蛋白浓度大于等于5mg/ml。

2.根据权利要求1所述的一种破伤风免疫球蛋白血样筛选试剂盒，其特征在于，所述辣根过氧化物酶的酶纯度大于等于3.0。

3.根据权利要求1或2所述的一种破伤风免疫球蛋白血样筛选试剂盒，其特征在于，所述标准品溶液的浓度分别为0.1IU/ml、1.0IU/ml、2.0IU/ml、4.0IU/ml、8.0IU/ml、12.0IU/ml。

4.根据权利要求1-3任一项所述的一种破伤风免疫球蛋白血样筛选试剂盒，其特征在于，试剂盒还包括浓缩洗涤液、样品稀释液、底物液A、底物液B和终止液。

5.根据权利要求4所述的一种破伤风免疫球蛋白血样筛选试剂盒，其特征在于，所述浓缩洗涤液为含有NaCl、吐温-20的pH7.2的浓缩磷酸缓冲液；所述底物液A内含有过氧化脲；所述底物液B内含有3,3',5,5'-四甲基联苯胺；所述终止液为0.5M的H₂SO₄溶液；所述样品稀释液内含有柠檬酸钠缓冲液和稳定剂B。

6.一种如权利要求5所述的破伤风免疫球蛋白血样筛选试剂盒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤S100a、制备破伤风类毒素灭活精纯抗原包被的酶标板：所述步骤S100a包括S110a至S130a：

步骤S110a、包被液配制：根据抗原包被浓度调试结果配制破伤风类毒素灭活精纯抗原包被液；

步骤S120a、封闭液配制：配制抗原封闭液；

步骤S130a、包被酶标板：

所述步骤S130a包括S131a至S134a：

步骤S131a、抗原包被：将配制的破伤风类毒素灭活精纯抗原包被液加入到酶标板上的孔中，每孔加入的量为100μl，并将酶标板置于2～8℃环境下包被18～24h；

步骤S132a、封闭：将配制的抗原封闭液加入到酶标板上的孔中，每孔加入的量为150μl，置于2～8℃环境下18～24h；

步骤S133a、干燥：酶标板置于30℃以下、湿度小于35％的环境中干燥2～4h；

步骤S134a、密封：用铝箔袋真空塑封，即得破伤风类毒素灭活精纯抗原包被的酶标板；

步骤S200a、酶标记物的制备：

将辣根过氧化物酶与鼠抗人IgG单克隆抗体采用过碘酸钠氧化法进行偶联，得到辣根过氧化物酶标记的鼠抗人IgG单克隆抗体，再将辣根过氧化物酶标记的鼠抗人IgG单克隆抗体与稳定剂A和生物防腐剂混合，得到酶标记物；

步骤S300a、进行浓缩洗涤液、样品稀释液、底物液A、底物液B、终止液、标准品溶液的分装。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述破伤风类毒素灭活精纯抗原包被液的浓度由破伤风类毒素灭活精纯抗原与酶标记物采用配合滴定法确定。

8.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S100a需在十万级洁净区进行。

9.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S200a和所述步骤S300a需在万级洁净区进行。

10.一种如权利要求5所述的破伤风免疫球蛋白血样筛选试剂盒的使用方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤S100b、用样品稀释液按1：200稀释血清/血浆样品或按1：100稀释全血样品，取100μL到破伤风类毒素灭活精纯抗原包被的酶标板的酶标孔中，37℃孵育30min；

步骤S200b、洗板5次，拍干；

步骤S300b、加酶标记物，37℃孵育30min；

步骤S400b、洗板5次，拍干；

步骤S500b、加入底物液A和底物液B，底物液A和底物液B中的显色剂被酶标记物上的辣根过氧化物酶催化显色，颜色的深浅和抗破伤风杆菌抗体的量成正比，若待测血清中不含抗破伤风杆菌抗体，则不显色；

步骤S600b、以标准品的含量为自变量(X)，以其对应的吸光度值为因变量(Y)，以四参数Logistic曲线拟合回归方程，将待测样品的吸光度值代入回归方程，计算出相应的含量，测定结果＞12.0IU/ml的样本须稀释后重新检测，线性回归系数r²＜0.99时，视为无效。