[发明专利]一种用于检测双胍类药物相关基因的引物组合物及试剂盒在审
申请号: | 201810388082.X | 申请日: | 2018-04-26 |
公开(公告)号: | CN108315398A | 公开(公告)日: | 2018-07-24 |
发明(设计)人: | 田晓丽 | 申请(专利权)人: | 宁波美丽人生医学检验所有限公司 |
主分类号: | C12Q1/6858 | 分类号: | C12Q1/6858;C12N15/11 |
代理公司: | 上海科盛知识产权代理有限公司 31225 | 代理人: | 赵志远 |
地址: | 315800 浙江省宁波市*** | 国省代码: | 浙江;33 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 试剂盒 引物组合物 检测 双胍类药物 引物组 基因多态性 相关基因 疗效相关基因 检测引物 特异性强 灵敏度 内控 探针 引物 敏感 | ||
本发明涉及一种用于检测双胍类药物相关基因的引物组合物及试剂盒,引物组合物包括OCT1引物组、MATE1引物组及SLC22A2引物组;试剂盒包括上述引物组合物。与现有技术相比,本发明釆用ARMS技术与SYBR染料相结合的方法,得到一种能够快速、敏感而且简便地检测双胍类药物疗效相关基因(OCT1、MATE1和SLC22A2)基因多态性的试剂盒,该试剂盒包括特异性ARMS检测引物、内控引物及PCR反应液,通过设计ARMS引物以及将Scorpions探针换为SYBR染料,以使检测成本大大降低,更适合中国患者OCT1、MATE1和SLC22A2基因多态性的检测,具有检测快速、灵敏度高、特异性强、方法简单、结果准确的优势,适于推广应用。
技术领域
本发明属于基因检测技术领域,涉及一种用于检测双胍类药物相关基因的引物组合物及试剂盒。
背景技术
双胍类药物,如二甲双胍、丁福明,是肥胖的糖尿病病人有效的一线用药,能够抑制糖原异生,减少肝脏葡萄糖产生,增加肌肉、脂肪组织对胰岛素的敏感性,促进组织对葡萄糖摄取和降低葡萄糖在肠道的吸收。
但由于存在个体差异,二甲双胍的疗效不尽相同,与其体内代谢最为相关的是有机阳离子转运蛋白(OCT)主要包括OCT1、OCT2与OCT3三个异构体,其中起关键作用的是位于肝脏的OCT1和位于肾脏的OCT2,OCT1负责将二甲双胍转入肝脏,而OCT2可使二甲双胍从血转运至肾小管上皮细胞,两者的基因多态性均可影响二甲双胍的代谢及疗效。研究发现,OCT1基因Gln97Ter和Pro117Leu位点的突变,显著降低肝细胞对二甲双胍的摄取,疗效显著降低。OCT2(SLC22A2)基因808G>T位点多态性,使二甲双胍的肾脏清除率降低。
毒素排出转运蛋白1(Multidrug and toxin extrusion 1,MATE1)广泛分布于肝脏、肾脏、骨骼肌、心脏等,但主要表达于肾脏近端小管和肝脏胆小管的官腔侧刷状缘膜,介导着阳离子药物从肾小管上皮细胞的外排和从胆小管排泄到胆汁。MATE1在体内二甲双胍肾排泄过程中起着关键作用。研究发现,MATE1rs2289669位点多态性与服用二甲双胍后HbAlc的改变水平显著相关,其中,rs2289669位点携带A突变的患者服药后,HbAlc的降低程度更高。
基因突变检测方法有很多,各国学者对此都进行了大量研究,已经报道的方法包括直接测序法、变性高效液相色谱分析(DHPLC)、PCR-SSCP/RFLP、Scorpions ARMS、TaqManPCR、ME-PCR等。这些方法各有优缺点,在临床和科研中较为常用的方法为直接测序法以及ARMS(Amplification refractory mutation system,扩增阻滞突变系统)法。
其中,直接测序法能够发现一些新的未知突变,但检测能力有限,其检测灵敏度约20%左右,而且步骤复杂,整个检测过程涉及PCR-电泳-测序-测序结果的解读等一系列步骤,费时费力。
ARMS方法是将分子信标(探针)与特异性的ARMS引物相结合创造出来的,ARMS引物3’端设计在突变位点,最后一个碱基与突变碱基配对,釆用无3’→5’外切酶活性的Taq DNA聚合酶,特异性地识别引物的3’末端,只有引物3’末端完全配对时,才能正常扩增,当引物3’末端发生错配时,不能有效的扩增。当引物与突变模板结合并延伸出相应的产物后,探针两端的荧光基团和淬灭基团分离而产生荧光。然而,现在市场上的类似试剂盒价格昂贵,应用受到限制。
发明内容
本发明的目的就是为了克服上述现有技术存在的缺陷而提供一种用于检测双胍类药物相关基因的引物组合物及试剂盒。
本发明的目的可以通过以下技术方案来实现:
一种用于检测双胍类药物相关基因的引物组合物,该引物组合物包括OCT1引物组、MATE1引物组及SLC22A2引物组;
所述的OCT1引物组包括以下引物:
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