[发明专利]一种同时检测卡那霉素和链霉素残留的适配体传感器的制备方法

说明书

本发明涉及一种同时检测卡那霉素和链霉素残留的适配体传感器的制备方法，其特征在于：运用Cd²⁺和Pb²⁺标记卡那霉素适配体（KAP）和链霉素适配体（STP），利用Cd²⁺和Pb²⁺等金属离子可以在不同电位下产生明显的差分脉冲伏安法（DPV）峰，构建适配体传感器用于检测卡那霉素（KAN）和链霉素（STR）；引入碳纤维‑纳米金（CNFs‑AuNPs）和石墨化的碳纳米管（MWCNT_Gr）纳米材料，增强适配体传感器的导电性能；通过共价结合，将适配体的互补链吸附到电极表面；提出的适配体传感器对KAN和STR具有高度的敏感性，重复性和特异性；同时应用于实际牛奶样品中KAN和STR的检测；此外，通过取代适当的适配体，可用于检测其他抗生素，为快速，灵敏地检测多种抗生素提供了平台。

技术领域

本发明提供一种同时检测卡那霉素和链霉素残留的适配体传感器的制备方法，属于生物传感器技术领域。

背景技术

氨基糖苷类抗生素（AAs）是杀死或减缓细菌生长来治疗细菌感染的一种抗生素类药物，作为常用的AAs，卡那霉素（KAN）和链霉素（STR）通过卡那霉素链霉菌的发酵产生；KAN和STR在食品中的残留量可能导致严重的毒副作用，如听力下降，肝肾损害和对药物过敏等，因此，避免滥用药物和控制、监测食品中的KAN和STR残留是非常重要的。

为了保护食品安全和公共健康，欧盟（EU）已经建立了牛奶中的KAN（150μg/kg）和STR（200μg/kg）的最大残留限量；因此，灵敏地检测KAN和STR的残留是有必要的，酶联免疫吸附测定（ELISA），免疫测定，气相色谱-质谱，比色和薄层色谱等多种分析方法已被用于检测动物源性食品和生物样品中的KAN和STR，虽然这些传统方法稳定可靠，但由于试剂用量大，样品预处理繁琐，步骤复杂，成本高昂等缺点，使其应用受到限制。

发明内容

本发明的目的在于开发一种简单灵敏的同时检测卡那霉素和链霉素残留的适配体传感器制备方法。

其技术方案为：适配体是指利用体外选择技术制备的短链单链DNA（ssDNA）或RNA序列，可选择性和灵敏地结合其预选目标物，作为生物测定中的识别探针，具有许多优点，例如低批次变异性，可用性，长期稳定性，抗变性，降解性，自动合成的适应性以及固有的选择性；因此，适配体作为生物传感应用中的分子识别元件是有希望的，迄今为止，已经产生了多种针对KAN和STR的高特异性和亲和性的适配体，在这些适配体的基础上还开发了一系列的比色和电化学适配体传感器。

所述的一种同时检测卡那霉素和链霉素残留的适配体传感器的制备方法，其特征在于：在同时检测多个靶标物质时，制作灵敏和可区分性的信号标签是非常重要的，Cd，Pb等金属纳米离子很容易通过差分脉冲伏安（DPV）在不同的电化学氧化还原电位下检测，在此研究中，KAN和STR的适配体分别用CdS和PbS标记。

所述的一种同时检测卡那霉素和链霉素残留的适配体传感器的制备方法，其特征在于：适配体与它们的互补链杂交，靶标物质可以与适配体结合，使得互补链从适配体中释放，造成相应信号的变化以定量检测靶标物质。

其制备原理为：运用Cd²⁺和Pb²⁺标记KAN适配体（KAP）和STR适配体（STP），利用Cd²⁺和Pb²⁺等金属离子可以在不同电位下产生明显的DPV峰，构建适配体传感器用于同时检测KAN和STR；引入碳纤维-纳米金（CNFs-AuNPs）和石墨化的碳纳米管（MWCNT_Gr）纳米材料，增强适配体传感器的导电性能；通过共价结合，将适配体的互补链吸附到电极表面；提出的适配体传感器对KAN和STR具有高度的敏感性，重复性和特异性；同时应用于实际牛奶样品中KAN和STR的检测；此外，通过取代适当的适配体，可用于检测其他抗生素，为快速，灵敏地检测多种抗生素提供了平台。