[发明专利]一种从蛹虫草培养基下脚料中提取并分离纯化多糖的方法

权利要求书

1.一种从蛹虫草培养基下脚料中提取并分离纯化多糖的方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)提取蛹虫草培养基多糖：将蛹虫草大米培养基下脚料干燥后粉碎，过筛得下脚料干粉；称取干粉加入15-16倍质量的蒸馏水，超声波处理30min以上，在70-80℃下回流提取1.5-2.0h，提取若干次合并提取液，提取液过滤后浓缩，得到多糖浓缩液；在多糖浓缩液中加入3-4倍体积的95％V/V乙醇，搅拌后于4℃中静置过夜；离心后将沉淀烘干得到蛹虫草培养基多糖提取物；

(2)蛹虫草培养基多糖的脱色：将蛹虫草培养基多糖提取物加蒸馏水溶解，调节pH值至8.0-8.5，滴加H₂O₂溶液至无色，50-55℃保温2h以上；

(3)酶法结合Sevage法脱蛋白：

3-1：将木瓜蛋白酶溶液与蛹虫草培养基多糖提取液混合，两者的体积比为1.0:1.5～1.0:1.7，60-70℃酶解2-3h；

3-2：在酶解液中加入1/5体积的Sevage试剂，振荡培养30min以上，然后多次离心直至无蛋白沉淀析出为止，取上清液，烘干得到蛹虫草培养基粗多糖；

步骤(3)所述的木瓜蛋白酶溶液用pH值6.0的PBS缓冲液配制而成，其中木瓜蛋白酶的浓度为250U/ml；

(4)蛹虫草培养基多糖的分离纯化：将蛹虫草培养基粗多糖用蒸馏水溶解后上DEAE琼脂糖凝胶FF离子交换层析柱，用NaCl溶液进行梯度洗脱，流速为0.5ml/min，每10min收集1管，以苯酚-硫酸法逐管检测多糖含量，依据洗脱曲线合并，得到两个蛹虫草培养基多糖组分；

步骤(4)所述的梯度洗脱，NaCl溶液的浓度分别是0、0.1、0.3、0.5、0.7、1.0mol/L。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(1)所述的过筛是过40目筛。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(1)所述的浓缩是在50-55℃下浓缩。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(1)所述的离心是5000r/min离心15min。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(2)所述的H₂O₂溶液，浓度为30％V/V。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(3)所述的Sevage试剂，是氯仿和正丁醇按体积比5:1配制而成。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(3)所述的振荡培养，摇床转速为150r/min。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(3)所述的离心为4000r/min离心20-30min。