[发明专利]一种从鹿角盘中提取鹿角盘天然肽和酶解制备多肽的方法

权利要求书

1.一种从鹿角盘中提取鹿角盘天然肽和酶解制备多肽的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)用粉碎机分级将鹿角盘粉碎至<80目，得鹿角盘粉，待用；

(2)将鹿角盘粉，按固液比1:5，用热的去离子水，浸泡3-4h；

(3)将浸泡过的鹿角盘粉连同浸泡水，用胶体磨循环研磨8-10min，使其成骨浆液，再添加去离子水，用稀NaOH调浆液为pH至8.5；

(4)将调好pH值的骨浆液，置于微波发生罐中处理20min，在温度50-60℃下保温40min，检测料液的pH值，当PH值≤8.0时，结束微波处理，当pH≥8.0时，再按上述方法微波15min，保温15min；

(5)将微波处理过的料液排出，用600目滤布，三足离心机脱液，滤渣收集待用，滤液用稀醋酸调pH至≤7.0；

(6)将调pH至≤7.0的透过液，用中空纤维膜进行微滤，透过液用能拦截10000Da和5000Da超滤膜进行2级超滤，5000Da超滤的透过液用能拦截500Da的纳滤过滤；

(7)检测纳滤的浓液，当浓度≥20％时，待冷却至室温送去冰柜冷冻至-28℃，当浓度小于20％时，则需低温浓缩至≥20％，再送去冷冻；

(8)将冷冻至-28℃的冰块取出，打碎至粒径小于50mm后，置于微波真空机或其他真空干燥机中干燥，控温58℃，得到疏松状结晶产品，即为鹿角盘天然肽，颜色呈浅绿色，肽段分布为6肽至31肽；

(9)将提取天然肽过程中得到的骨渣，微滤及2级超滤所得浓液合并，调合并液的浓度为10-13％，用稀NaOH调合并液的pH至9.5，置于微波频率为2450MHz的微波罐中进行处理，控温60℃，微波处理时间为30min，在温度50-60℃下保温60min，检测料液pH值，当pH值<8.4时，结束微波处理，当pH值>8.4时，再按上述微波处理15min，保温15min；

(10)将微波处理过的料液，按底物的量的3.5％添加碱性蛋白酶进行微波辅助酶解，微波辅助酶解时间20min，控温60℃，在温度50-60℃下保温，当酶解液的pH下降至7.0后结束酶解，启动微波罐最大功率升温至85-90℃，保持5-8min，灭掉酶的活性；

(11)将灭酶酶解液排出，冷却至<50℃后，进行物料分离，先用600目滤布三足离心机脱液，滤渣收集待用；离心的透过液处理与提取天然肽相同，离心所得的骨渣与微滤和2级超滤所得的浓液合并，在<75℃的条件下进行微波真空干燥，所得的产品即为鹿角霜；纳滤所得的浓液按提取天然肽的方法处理，所得产品为肽段分布6肽至20肽。

2.根据权利要求1所述的从鹿角盘中提取鹿角盘天然肽和酶解制备多肽的方法，其特征在于，步骤(2)中去离子水的温度为60-70℃。

3.根据权利要求1所述的从鹿角盘中提取鹿角盘天然肽和酶解制备多肽的方法，其特征在于，步骤(3)中鹿角盘粉与去离子水的固液比为1：8。

4.根据权利要求1所述的从鹿角盘中提取鹿角盘天然肽和酶解制备多肽的方法，其特征在于，步骤(4)中微波发生罐的参数为2450mHz，温度为60℃。

5.根据权利要求1所述的从鹿角盘中提取鹿角盘天然肽和酶解制备多肽的方法，其特征在于，步骤(6)中10000Da超滤的操作参数为：泵压0.2-0.4Mpa，温度40-45℃，膜面流量1-1.5m/s，浓缩比3-4倍；所述的5000Da超滤的操作参数为：泵压0.3-0.5MPa，温度40-45℃，膜面流量1-1.5m/s，浓缩比4-5倍。

6.根据权利要求1所述的从鹿角盘中提取鹿角盘天然肽和酶解制备多肽的方法，其特征在于，步骤(6)中500Da纳滤膜过滤的操作参数为：泵压0.4-0.6MPa，循环流量1.5-2.5m³/h。

7.根据权利要求1所述的从鹿角盘中提取鹿角盘天然肽和酶解制备多肽的方法，其特征在于，步骤(10)中碱性蛋白酶的浓度为20万u/g。

8.根据权利要求1所述的从鹿角盘中提取鹿角盘天然肽和酶解制备多肽的方法，其特征在于，步骤(11)中微波真空干燥机的真空度为0.05-0.08MPa，温度为58℃。