[发明专利]一种真菌预处理木质纤维素及直接微生物转化发酵产氢的方法

权利要求书

1.一种真菌预处理木质纤维素及直接微生物转化发酵产氢的方法，其特征在于：包括以下步骤：

一、预处理：将可食用真菌接种于木质纤维素原料中进行预处理；

二、干燥：将步骤一中预处理后的木质纤维素烘干至恒重；

三、发酵产氢：配置产氢菌的营养盐溶液，加入步骤二干燥后的预处理木质纤维素，组成微生物直接发酵产氢培养基，向培养基中通入纯度为99.99％的氮气半小时，然后接种产氢菌的种子液发酵产氢。

2.根据权利要求1所述方法，其特征在于：步骤一所述预处理条件为25-30℃、有氧条件，预处理时间为10-20天。

3.根据权利要求2所述方法，其特征在于：步骤一中所述可食用真菌为逆型金钱菌G.contrarius J2；步骤一所述木质纤维素采用稻草，麦秸，或玉米秸秆中的一种或二种或三种。

4.根据权利要求3所述方法，其特征在于：步骤一具体为：木质纤维素风干，粉碎，过60目筛，所得粉末在105℃烘干至恒重；G.contrarius J2经平板PDA培养基活化，于26℃下培养一周；将每5g木质纤维素粉末置于500mL三角瓶，加入15mL无菌水(pH 7.0)，每瓶接种G.contrarius J2孢子静置培养；可食用真菌接种采用孢子悬液，浓度控制在约2×10⁶个孢子/mL，每瓶接种量为2×10⁷个孢子。

5.根据权利要求1所述方法，其特征在于：步骤二干燥温度为105℃。

6.根据权利要求1所述方法，其特征在于：步骤三所述干燥后的木质纤维素在培养基中的含量为15-35g/L；步骤三接种产氢菌种子液后的培养基初始pH为6.5；发酵温度为60℃，发酵过程中搅拌速度为150rpm/min，发酵环境为厌氧，发酵产氢时间为24-72h。

7.根据权利要求6所述方法，其特征在于：步骤三中所述产氢菌为热解糖厌氧芽孢杆菌M18(Thermoanaerobacterium thermosaccharolyticum M18)。

8.根据权利要求7所述方法，其特征在于：步骤三中所述产氢菌的营养盐溶液，由氯化铵、氯化钠、磷酸氢二钾、半胱氨酸、MgCl₂·6H₂O、氯化钾、微量金属元素贮液、0.1‰(g/L)的刃天青水溶液制备而成；其中所述的微量金属元素贮液包括氯化亚铁1.5g/L，氯化锌70mg/L，硼酸6mg/L，MnCl₂·4H₂O 0.1g/L，CuCl₂·2H₂O 2mg/L，CoCl₂·6H₂O 0.19g/L，NiCl₂·6H₂O24mg/L，Na₂MO₄·H₂O 36mg/L，钨酸钠15mg/L，Na₂SeO₄·5H₂O 15mg/L；营养盐溶液中包括氯化铵1.0g/L、氯化钠的1.0g/L、磷酸氢二钾1.5g/L、磷酸二氢钾0.5g/L、半胱氨酸0.5g/L、MgCl₂·6H₂O 0.5g/L、氯化钾0.2g/L、刃天青0.1‰(g/L)；微量金属元素贮液体积占微生物直接发酵产氢培养基总体积的千分之一、0.1‰(g/L)的刃天青水溶液体积占微生物直接发酵产氢培养基总体积的千分之一。

9.根据权利要求8所述方法，其特征在于：步骤三所述产氢菌种子液的接种量是微生物直接发酵产氢培养基体积的4％，接种的产氢菌种子液取生长至对数期的液体悬浊液。