[发明专利]一种促进观赏海棠叶片组织类黄酮物质积累的方法

权利要求书

1.一种促进观赏海棠叶片组织中类黄酮物质积累的方法，其特征在于，包括：

以观赏海棠叶类品种的组培苗为材料，将该品种的组培苗在分别加入不同浓度褪黑素的褪黑素培养基中进行扩繁，然后在正常光照下进行培养2周，褪黑素的不同浓度分别为：0μg/l、50μg/l、100μg/l、200μg/l、500μg/l、1000μg/l；

选取表型明显、长势较好的叶片存样，后续从存样叶片提取RNA，反转成cDNA进行qRT-PCR实验，检测花色素苷代谢途径中关键结构基因的转录水平，并检测类黄酮物质的含量，确定最优花色素苷积累量、花色素苷代谢基因的表达量和类黄酮物质的含量对应处理的褪黑素浓度作为促进观赏海棠叶片组织中类黄酮物质积累的最优浓度，最优浓度为200μg/l；

所述褪黑素培养基除褪黑素外成分为：浓度为4.74g/l的MS培养基、浓度为1mg/l 6-BA溶液、浓度为0.05mg/l的NAA溶液、浓度为30g/L的蔗糖和浓度为7g/L的琼脂；

以确定的最优浓度的褪黑素培养基对观赏海棠叶类品种的组培苗进行扩繁培养。

2.根据权利要求1所述的一种促进观赏海棠叶片组织中类黄酮物质积累的方法，其特征在于，所述观赏海棠叶类品种的组培苗为观赏海棠叶类品种生长20～30天的继代苗。

3.根据权利要求1至2任一项所述的一种促进观赏海棠叶片组织中类黄酮物质积累的方法，其特征在于，所述褪黑素培养基中，所述6-BA溶液为6-Benzyl Aminopurine溶液，母液为1mg/mL，每升加入2000微升；

所述NAA溶液为Naphthylacetic acid溶液，母液为1mg/mL，每升加入400微升。

4.根据权利要求1至2任一项所述的一种促进观赏海棠叶片组织中类黄酮物质积累的方法，其特征在于，所述方法中，褪黑素培养基配好后，高压灭菌后再使用。

5.根据权利要求1至2任一项所述的一种促进观赏海棠叶片组织中类黄酮物质积累的方法，其特征在于，所述方法中，叶片的取样的方式为：用剪刀镊子只取叶片部分，用50ml离心管收集，用液氮冻存。

6.根据权利要求1至2任一项所述的一种促进观赏海棠叶片组织中类黄酮物质积累的方法，其特征在于，所述方法中，组培苗材料由以下培养方式获得：

将观赏海棠叶类品种继代后将苗置于组培间架子上；培养条件：相对湿度60～70%，温度24～26℃，光照时间16 h光照/8 h黑暗光周期，光照强度1500～2000 Lx，培养15天得到组培苗。

7.根据权利要求1至2任一项所述的一种促进观赏海棠叶片组织中类黄酮物质积累的方法，其特征在于，所述方法中，观赏海棠叶类品种为观赏海棠常色紫叶类品种。