[发明专利]鱼胶原抗氧化肽的制备方法

说明书

本发明公开了鱼胶原抗氧化肽的制备方法，其具体步骤为：将鱼皮经氧氧化钠溶液和异丙醇溶液预处理，酸提取得胶原蛋白粉，再经胶原酶和风味蛋白酶酶解，酶解过程中用超滤膜超滤，超滤液经纳滤膜纳滤，获得浓缩多肽液，经凝胶柱层析得凝胶柱层析酶解物，然后用双蒸水配成溶液，利用高效液相色谱进行分离，流动相为乙腈和酒石酸水溶液，将属于同一峰的收集液混合，除去乙腈和酒石酸，冻干，即得鱼胶原抗氧化肽。有益效果为：本发明制备方法具有蛋白酶用量少、酶解时间短，蛋白质降解效果好、抗氧化肽得率和纯度高、感官接受度较高的优势，能够减少苦味肽的生成和产物的损失。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及鱼胶原抗氧化肽的制备方法。

背景技术

我国地大物博，水域辽阔，水产资源十分丰富，近几年来，随着生活水平的提高，人们对水产资源需求的多样性及实用性逐渐提高，从而促进我国水产加工业的飞速发展。但是，在水产加工业高速发展的同时会产生大量的鱼下脚料，例如鱼皮、鱼鳞、内脏、鱼头等，这些下脚料约占原料鱼的40%~50%。有关资料表明，鱼下脚料中含有丰富的营养活性物质，这样不仅造成了大量的资源浪费，如果处理不当还有可能造成严重的环境污染。因此，如何能够高效利用鱼下脚料中的营养活性物质已经引起国内外科研工作者的高度重视。鱼皮中胶原蛋白的含量最高可达蛋白质总量的80%以上，且脂肪含量极低，为了充分利用鱼皮中的蛋白资源，许多科研工作者探索利用鱼皮水解生成胶原蛋白。目前水解鱼皮中的粗蛋白主要有两种方法：化学降解法和酶水解法。化学降解法是利用强酸强碱肽键来达到水解蛋白的目的，实验方法操作简单，但是反应剧烈不易控制，往往造成氨基酸的损坏。酶水解法反应条件温和，能很好的分离蛋白得到低分子多肽及氨基酸，所以得到广大科研工作者的青睐。

现有的酶解技术都是侧重于控制底物浓度、温度、pH、酶的用量等初始反应条件，然而随着酶解反应的进行，底物浓度和pH都是变化的，导致胶原多肽酶解过程存在复杂、繁琐、难于控制的问题，因此现有技术对反应过程中这些条件的变化很难进行有效控制，同时对苦味肽的控制也是酶解反应后采取方法脱除，没有在反应过程中控制苦味肽的产生。

发明内容

本发明的目的在于提供一种蛋白酶用量少、酶解时间短，蛋白质降解效果好、抗氧化肽得率和纯度高、感官接受度较高，减少苦味肽的生成和产物的损失的鱼胶原抗氧化肽的制备方法。

本发明针对上述技术中提到的问题，采取的技术方案为：

鱼胶原抗氧化肽的制备方法，包括原料预处理、胶原蛋白粉制备、酶解、纳滤、凝胶柱层析和RP-HPLC纯化，其具体步骤为：

原料预处理：将鱼皮切碎后组织捣碎，按料液比为1:4-6g/mL将鱼皮加入浓度为0.08-0.13M的氧氧化钠溶液中，浸泡并不断搅动，1.5-2.5h后用流动水冲洗至中性，再按料液比为1:1.5-2.5g/mL加入浓度为2-5%的异丙醇溶液，浸泡10-15h后用蒸馏水反复清洗至中性后纱布过滤，充分沥干，即得预处理鱼皮，鱼胶原抗氧化肽在制备前，因其中含有很多杂蛋白及脂肪，所以要先进行前处理来去除这些杂蛋白、脂肪等，可减少此类物质对鱼胶原抗氧化肽的影响；

胶原蛋白粉制备：按料液比为1:8-11向预处理鱼皮中加入浓度为0.2-0.5M乙酸溶液，转速为130-170r/min下搅拌浸提5-7h，离心取上清，沉淀继续进行二次酸提取，离心上清液减压蒸馏，冷冻干燥即得胶原蛋白粉，该步骤使胶原蛋白保留了其独特的超螺旋结构，性质稳定，胶原蛋白的提取率高达23.46%，为接下来的酶解做准备；