[发明专利]凝血酶抑制剂在制备抗肿瘤侵袭转移药物中的用途

说明书

本发明属生物技术领域，涉及凝血酶抑制剂新的药用用途，具体涉及凝血酶抑制剂尤其是二价直接凝血酶抑制剂在制备抗肿瘤侵袭转移药物中的用途。本发明采用具有抗凝活性的直接凝血酶抑制剂短肽DTIP进行了体外细胞试验和体内动物实验，试验结果显示，所述的二价直接凝血酶抑制剂DTIP，在体外能抑制肿瘤的侵袭和转移；体内实验显示二价直接凝血酶抑制剂DTIP对肿瘤发生发展具有影响进；进一步，所述的直接凝血酶抑制剂短肽DTIP可制备抗肿瘤侵袭转移药物。

技术领域

本发明属生物技术领域，涉及凝血酶抑制剂新的药用用途，具体涉及凝血酶抑制剂尤其是二价直接凝血酶抑制剂在制备抗肿瘤侵袭转移药物中的用途。

背景技术

资料显示，恶性肿瘤发病率居高不下，严重威胁人类健康，已对人们的生活造成巨大影响。据统计，我国肺癌、乳腺癌均呈高发病率，和高死亡率；以肺癌为例，确诊为TNM分期为II期或II期以上的患者的平均生存期不超过48个月，随着恶性程度的升高，生存期也随之降低。肺癌等恶性肿瘤的诊断和治疗是目前研究的热点之一，其中针对肺癌转移的预防和治疗的研究特别重要。

研究显示，恶性肿瘤发生、发展与凝血系统异常密切相关，其表现为恶性肿瘤晚期，患者的血液呈高凝状态，凝血系统高度激活。临床研究显示，4％-20％的肿瘤患者罹患静脉血栓，而据尸检报告显示此数据可达50％。研究显示，肿瘤患者静脉血栓的比例高出其他人群4.1倍；化疗后，此系数上升至6.5倍。有研究报道了肿瘤的发生和发展与血液高凝状态具有双向关系，即肿瘤组织可以生成凝血因子，引发血液高凝状态；而血栓的形成又可以促进肿瘤的恶化，形成恶性循环；尽管这一多方面的关系涉及到多种多样的机制，但有关研究者认为抗凝血药物可能成为一种有吸引力的抗癌疗法。

自从Armand Trousseau阐述了肿瘤与凝血系统之间存在着某种关系后，若干研究学者试图阐明癌症与凝血之间相关性的致病机制；但其中仍然有不清楚之处。20世纪90年代初有研究首次报道了凝血酶在肿瘤细胞转移中的作用，有关研究中将主动脉内皮细胞与W256细胞共孵育，结果显示凝血酶与主动脉内皮细胞以及纤维蛋白原的粘附增加了50％-300％；动物试验中，给乳腺癌(3503)，直肠癌(C26)的小鼠模型注射凝血酶后，显示能促进癌细胞的肺部转移；另，将人卵巢癌细胞移植到小鼠体内，注射凝血酶，能增加肿瘤的体积并提高小鼠死亡率。

有研究公开了PAR-1是最先发现的蛋白酶激活受体，在正常人组织上发现PAR-1后不久，在人肿瘤细胞中证实了它的的存在，随后的研究发现在乳腺癌，鼻咽癌，胃癌，黑素瘤，胶质母细胞瘤，和骨肉瘤等肿瘤细胞中均有PAR-1表达；蛋白酶活化受体(PARs)是一类跨膜G蛋白偶联受体(GPCR)，由七个跨膜α螺旋，胞质结构域和胞外N端组成；凝血酶与PAR-1N端LDP R41-S42序列结合，切割R41-S42肽键，从而激活PAR-1，诱导跨膜信号传导(如图1所示)，在此过程中发挥主要功能的是凝血酶的exosite I位点和C端。

目前研究发现凝血酶和PAR-1通过不同途径介导了细胞内的信号传导，参与肿瘤细胞的发生和发展；由凝血酶介导的PAR-1构象变化可以使PAR-1与Gα蛋白(Gαq，Gαi和Gα12/13)和Gβγ偶联；由PAR-1和Gαq组成的聚合体可以激活有丝分裂原活化蛋白(MAP)激酶，提高Ca²⁺浓度，而PAR-1与Gα12/13的复合体可以激活G蛋白，Rho和Rac。PARs还诱导与蛋白激酶C和酪氨酸激酶相关的级联反应；PAR-1与Gβγ的聚合体会活化磷脂酰肌醇激酶3(PI3-K)，而与Gαi的复合可以抑制腺苷酸环化酶(AC)；研究显示，激活PAR-1，可以提高细胞因子，趋化因子和生长因子的转录，增加生物活性脂质的表达，调节细胞增殖，凋亡，粘附和迁移，促进肿瘤生长，侵袭和转移(如图2所示)。