[发明专利]一种通过微生物发酵制备非那佐辛的方法及其菌株

说明书

本发明公开了一种通过微生物发酵制备非那佐辛的方法及其菌株。本发明提供了Pseudogymnoascus pannorum BJZ13在制备非那佐辛中的应用；所述Pseudogymnoascus pannorum BJZ13在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏登记号为CGMCC No.15389。Pseudogymnoascus pannorum BJZ13发酵培养后可以得到非那佐辛，操作简单、成本低廉、生产周期短，具有工业化规模生产的应用潜力。本发明为非那佐辛类药物的资源开发提供了新途径。

技术领域

本发明涉及生物化学领域，具体涉及一种通过微生物发酵制备非那佐辛的方法及其菌株。

背景技术

非那佐辛是一种阿片类止痛药，具有类似喷他佐辛的作用。非那佐辛有镇痛的功效，其效力是吗啡的4倍，且不会引起Oddi括约肌痉挛，是比吗啡更适合用于治疗胆道或胰腺疼痛的药品。

非那佐辛目前主要是以化学合成的方法进行生产。利用微生物生产非那佐辛，可以获得纯度较高的非那佐辛单体，从而避免化学合成副产物的残留，并且微生物为活体为合成场所，利用生物自身的资源产生非那佐辛药物，可以避免资源的浪费和对环境的破坏。微生物易于繁殖和大量培养，操作简单、成本低廉、生产周期短，具有工业化规模生产的应用潜力，是生产非那佐辛药物的理想途径。

发明内容

本发明的目的是提供一种通过微生物发酵制备非那佐辛的方法。

第一方面，本发明要求保护Pseudogymnoascus pannorum BJZ13在制备非那佐辛中的应用。

其中，所述Pseudogymnoascus pannorum BJZ13已于2018年3月8日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所)，保藏登记号为CGMCC No.15389。

第二方面，本发明要求保护一种制备非那佐辛的方法。

本发明所提供的制备非那佐辛的方法，可包括如下步骤：发酵培养所述Pseudogymnoascus pannorum BJZ13，得到非那佐辛。

进一步地，所述发酵培养的培养基的溶剂为水，溶质及浓度为：可溶性淀粉20g/L，FeCl₃ 0.00065g/L，MgSO₄ 0.5g/L，KH₂PO₄ 0.5g/L，(NH₄)₂SO₄ 0.65g/L，氨苄抗生素1μl/ml；pH至7.2-7.4。

进一步地，所述发酵培养的条件具体可为：28℃、120r/min振荡培养34天。

进一步地，所述方法还包括从所述发酵培养得到的发酵体系中分离菌液的步骤。具体可采用滤纸从所述发酵培养得到的发酵体系中分离菌液。所述滤纸具体可为：定性滤纸(102)中速。

进一步地，所述方法还包括使用有机溶剂对所述菌液进行提取的步骤。所述有机溶剂具体可为乙酸乙酯和二氯甲烷。

更进一步地，采用乙酸乙酯和二氯甲烷对所述菌液进行提取可按照包括如下步骤的方法进行：采用乙酸乙酯对所述菌液进行萃取；将所得乙酸乙酯相减压蒸馏，得到浸膏；将所得浸膏用二氯甲烷进行提取，减压蒸馏，得到二氯甲烷相浸膏。

其中，所述“采用乙酸乙酯对所述菌液进行萃取”可为采用乙酸乙酯对所述菌液进行多次(如三次)萃取；后一次萃取的被萃取物为前一次萃取所得的水相。

更加具体地，采用乙酸乙酯和二氯甲烷对所述菌液进行提取可按照包括如下步骤的方法进行：