[发明专利]一种利用微生物生产酸性蛋白酶的方法

说明书

本发明属于酸性蛋白酶生产技术领域，具体涉及一种利用微生物生产酸性蛋白酶的方法，包括以下步骤：制备灭菌的固体培养基，其中盛放固体培养基所用曲盘的结构如下：包括一个底部设有若干透气孔的盘体，并且盘体的底部可拆卸的安装在盘体侧壁上，盘体内横向安装有透气承重网，透气承重网和盘体底部之间填充有第一纱布层，盘体上还覆盖有透气网盖；接种与发酵：将发酵菌的液体母种接种于灭菌的固体培养基中，然后进行发酵，发酵过程中每天补水；最后进行酸性蛋白酶的提取。本发明通过改变传统的曲盘结构和液体发酵工艺，采用固体发酵方式来提高酶活力。

技术领域

本发明属于酸性蛋白酶生产技术领域，具体涉及一种利用微生物生产酸性蛋白酶的方法。

背景技术

酸性蛋白酶是指蛋白酶具有较低的最适pH，比如胃蛋白酶的最适pH在2左右。酸性蛋白酶在白酒工业、食品工业、啤酒生产和毛皮软化方便均具有广泛的应用。利用微生物生产酸性蛋白酶是国内外最常用的方法之一，目前我国国内生产酸性蛋白酶的厂家基本上都是用537酸性蛋白酶菌种生产，发酵酶活力在6000-7000U/ml，制成粉剂后，粉剂成品的酶活力有2-5万U/g。537酸性蛋白酶菌种是较早研发的菌株，也是使用较广泛的菌株。随着微生物发酵技术的不断发展，以及不同人群对酸性蛋白酶活力的要求越来越高，6000-7000U/ml的发酵酶活力已经难以满足人们的要求，需要不断的开发出新的产酶菌株，高酸性蛋白酶华根酶CGMCC No.8589就是新开发的菌株之一。

微生物菌种本身固然是影响酸性蛋白酶活力的重要因素，但是培养基和发酵工艺的影响也不可小觑。由于微生物筛选工作的繁复性和筛选结果的不确定性，单靠筛选新菌株来提高酶活力显然效率较低。通过改变发酵工艺的方式来提高酶活力就显得尤为必要。

发明内容

本发明的目的是提供一种利用微生物生产酸性蛋白酶的方法，开发了一种新发酵工艺，提高酸性蛋白酶的发酵酶活力，也提高了生产效率。

本发明提供的一种利用微生物生产酸性蛋白酶的方法，包括以下步骤：

S1，制备灭菌的固体培养基

盛放固体培养基所用曲盘的结构如下：包括一个底部设有若干透气孔的盘体，并且所述盘体的底部可拆卸的安装在所述盘体侧壁上，所述盘体内横向安装有透气承重网，所述透气承重网和所述盘体底部之间填充有第一纱布层，所述盘体上还覆盖有透气网盖；

将固体培养基盛装于盘体内的透气承重网之上，然后盖上透气网盖，连同固体培养基和曲盘一起灭菌，自然冷却至25～35℃时得到灭菌的固体培养基，备用；

S2，接种与发酵

打开所述透气网盖，将发酵菌的液体母种接种于灭菌的固体培养基中，并与固体培养基混匀，然后在固体培养基盖上灭菌的第二纱布层，最后盖上透气网盖，维持发酵室内的温度为28～32℃，发酵100～140h；发酵过程中每天补水；

发酵过程中待菌丝长满整个固体培养基表面时，喷施100mg/L的萘乙酸溶液，翻曲一次，使发酵物料蓬松；其中，每100平方厘米面积的固体培养基对应喷施萘乙酸溶液2～3ml；

S3，酸性蛋白酶的提取

发酵完毕后，将发酵物料中的酸性蛋白酶提取出，制成酶制剂产品。

优选的，上述的利用微生物生产酸性蛋白酶的方法中，所述固体培养基在所述透气承重网上盛装的厚度为2～4cm。

优选的，上述的利用微生物生产酸性蛋白酶的方法中，每天补水两次，每100平方厘米面积的培养基对应喷水50ml，并且每次补水时从透气网盖向下喷水25ml，从盘体底部向上喷水25ml。

优选的，上述的利用微生物生产酸性蛋白酶的方法中，所述盘体底部还安装有支撑柱，所述盘体下方设有接水盘，并且所述盘体放置在所述接水盘内，发酵过程中每天补水时，向所述接水盘内添加水，并使水的液面与第一纱布层接触。