[发明专利]一种用于A型和O型口蹄疫病毒鉴别诊断的引物组及试剂盒

说明书

本发明公开了一种用于A型和O型口蹄疫病毒鉴别诊断的引物组及试剂盒，所述的引物组包括引物S1、S2，其中：S1:5’‑ATTCTTAGCCTAGCACCACAT‑3’,S2：5’‑CCCAATAAGCTTAGTCGACTGTATG‑3’。本发明根据A型和O型口蹄疫病毒之间的差异，设计特异性引物S1、S2，能够对A型和O型口蹄疫病毒进行特异性扩增。本发明的专用试剂盒具有很强的敏感性、特异性，且与病毒分离和IFA等方法相比符合率可达100％，能够广泛用于A型和O型口蹄疫病毒的鉴别诊断。

技术领域

本发明涉及兽医生物病毒检测技术领域，具体涉及一种用于A型和O型口蹄疫病毒鉴别诊断的引物组及试剂盒。

背景技术

口蹄疫(Foot-and-mouth disease，FMD)是偶蹄类动物的一种高度接触性传染病。口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus，FMDV)是FMD的病原体，属于小RNA病毒科的口蹄疫病毒属，是无囊膜的单股正链RNA病毒，FMDV包括7种血清型(A、O、C、Asial、SAT1、SAT2、SAT3)。在中国，O型血清型口蹄疫呈散在发生，主要感染猪、牛、羊等偶蹄动物。由于口蹄疫病毒包括多种血清型，症状也相似，因此建立一种能够快速区分A型口蹄疫和O型口蹄疫的多重PCR诊断方法和专用试剂盒，能够方便在疫病发生早期快速、准确的诊断疫病，为疫病的防控提供有效的参考。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种用于A型和O型口蹄疫病毒鉴别诊断的引物组及试剂盒，该试剂盒能够快速区分A型和O型口蹄疫病毒。

为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：

一种用于A型和O型口蹄疫病毒鉴别诊断的引物组，所述的引物组包括引物S1、S2，其中：

S1：5’-ATTCTTAGCCTAGCACCACAT-3’；

S2：5’-CCCAATAAGCTTAGTCGACTGTATG-3’。

一种所述的引物组在制备用于A型和O型口蹄疫病毒鉴别诊断试剂盒中的应用。

一种所述的引物组的A型和O型口蹄疫病毒鉴别诊断试剂盒。

所述的试剂盒还包括核酸提取试剂、反转录试剂、PCR扩增试剂、和/或琼脂糖凝胶电泳试剂。

所述的反转录试剂包括10×M-MLV缓冲液、dNTP、M-MLV反转录酶、RNase酶抑制剂、S2引物。

所述的PCR扩增试剂包括10×PCR扩增缓冲液、dNTP、S1引物、S2引物、Taq DNA聚合酶和双蒸水。

所述的PCR扩增试剂所构建的PCR扩增体系为：10×PCR扩增缓冲液5.0μL、2.5mmol/L dNTP8.0μL、10mmol/L S1引物1.0μL、10mmol/L S2引物1.0μL、5U/μL Taq DNA聚合酶1.0μL、模板3.0μL，补加双蒸水至50μL。

一种所述的试剂盒的使用方法，包括核酸提取、反转录、PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳。

还包括对琼脂糖凝胶电泳的结果进行分析：当扩增片段为1472bp，则样本中的牛病毒性腹泻病毒为疫苗株；当扩增片段大小为824bp，则样本中的牛病毒性腹泻病毒为现地分离株。

所述的PCR扩增条件为：95℃预变性5min；94℃变性30s，57℃退火30s，72℃延伸90s，共35个循环；最后72℃延伸10min。

本发明的有益效果：