[发明专利]一种H3N2亚型猪流感病毒株与疫苗株鉴别诊断的引物组及试剂盒在审
| 申请号： | 201810410560.2 | 申请日： | 2018-05-02 |
| 公开（公告）号： | CN108315498A | 公开（公告）日： | 2018-07-24 |
| 发明（设计）人： | 郭庆君;宋桂芹;邢树杰;张清国 | 申请（专利权）人： | 郭庆君;宋桂芹;邢树杰;张清国 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11;C12R1/93 |
| 代理公司： | 广州天河万研知识产权代理事务所(普通合伙) 44418 | 代理人： | 刘强;陈轩 |
| 地址： | 528051 广东省*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 猪流感病毒 疫苗株 鉴别诊断 引物组 试剂盒 特异性扩增 特异性引物 专用试剂盒 病毒分离 引物 | ||
1.一种H3N2亚型猪流感病毒株与疫苗株鉴别诊断的引物组，其特征在于，所述的引物组包括S1、S2、S3，其中：
S1：5’-ACTTAGGCTAGCATCACATT-3’；
S2：5’-CAATAAGCTGAGTCGACCGTATGG-3’；
S3：5’-ATAAGCTTAGTCGACTGATT-3’。
2.一种如权利要求1所述的引物组在制备H3N2亚型猪流感病毒株与疫苗株鉴别诊断试剂盒中的应用。
3.一种包含如权利要求1所述的引物组的H3N2亚型猪流感病毒株与疫苗株鉴别诊断试剂盒。
4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒还包括核酸提取试剂、反转录试剂、PCR扩增试剂、和/或琼脂糖凝胶电泳试剂。
5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述的反转录试剂包括10×M-MLV缓冲液、dNTP、M-MLV反转录酶、RNase酶抑制剂、S2引物。
6.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述的PCR扩增试剂包括10×PCR扩增缓冲液、dNTP、S1引物、S2引物、Taq DNA聚合酶和双蒸水。
7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述的PCR扩增试剂所构建的PCR扩增体系为：10×PCR扩增缓冲液5.0μL、2.5mmol/L dNTP8.0μL、10mmol/L S1引物1.0μL、10mmol/LS2引物1.0μL、5U/μL Taq DNA聚合酶1.0μL、模板3.0μL，补加双蒸水至50μL。
8.一种如权利要求3-7任一项所述的试剂盒的使用方法，其特征在于，包括核酸提取、反转录、PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳。
9.根据权利要求8所述的试剂盒的使用方法，其特征在于，还包括对琼脂糖凝胶电泳的结果进行分析：当扩增片段为1700bp，则样本中的H3N2亚型猪流感病毒为疫苗株；当扩增片段大小为1400bp，则样本中的H3N2亚型猪流感病毒为病毒株。
10.根据权利要求8所述的试剂盒的使用方法，其特征在于，所述的PCR扩增条件为：95℃预变性5min；94℃变性30s，57℃退火30s，72℃延伸90s，共35个循环；最后72℃延伸10min。
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