[发明专利]一种鸽I型副粘病毒病的检测试剂盒及其检测方法

说明书

本发明公开了一种鸽I型副粘病毒病的检测试剂盒，包括两条特异性引物，所述试剂盒还包括M‑MLV反转录酶、M‑MLV酶反应缓冲液、dNTPs、Taq DNA聚合酶、Mg2⁺和PCR反应缓冲液。本发明还提供一种鸽I型副粘病毒病的检测方法，其包括以下步骤：(1)提取待测样品总RNA，(2)设计并合成引物，(3)RT‑PCR，(4)电泳检测。本发明提供了一种鸽I型副粘病毒病的检测试剂盒与检测方法，利用RT‑PCR方法检测鸽I型副粘病毒病，克服了分离鸽I型副粘病毒病核酸的繁琐步骤，节省时间，大大提高了检测的可操作性、灵敏性和可重复性，为鸽I型副粘病毒病的检测提供了有效方法。

技术领域

本发明属于病毒检测技术领域，具体涉及一种鸽I型副粘病毒病的检测试剂盒及其检测方法。

背景技术

鸽I型副黏病毒病是由鸽副黏病毒引起的一种高度接触性、败血性传染病，俗称“鸽瘟”，具有与新城疫病原类似的特性。各种品种、年龄、性别的鸽都易感，发病没有明显的季节性，一年四季都有发生。鸽被I型副黏病毒感染后，潜伏期1-10天，通常1-5天。病鸽表现扭头、曲颈、转圈，有的不能站立,有的翅下垂，有的蹲伏或侧卧。食欲下降，嗉囊空虚，充满液体或气体，倒提口流黏液。拉黄绿色稀便，鸽的羽毛、趾爪常被粪便污染为黄绿色。目前此病无有效的药品。

由于该病的死亡率一般可达20％-80％，对养鸽业危害极大，故需一种专门针对鸽I型副粘病毒病的检测试剂盒及其检测方法，及早发现快速诊断。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种鸽I型副粘病毒病的检测试剂盒与检测方法。

技术方案：本发明所述的一种鸽I型副粘病毒病的检测试剂盒，包括两条特异性引物：

SPLVGV-1：5’-CACAGTCAAACCCGAACAAAGGATT-3’；

SPLVGV-2：5’-GAAGCATAGCGTGCTAAACCCAGTT-3’。

进一步的，所述试剂盒还包括M-MLV反转录酶、M-MLV酶反应缓冲液、dNTPs、TaqDNA聚合酶、Mg2+和PCR反应缓冲液。

进一步的，所述试剂盒还包括标准阳性模板。

本发明中还提供一种鸽I型副粘病毒病的检测方法，其包括以下步骤：

(1)提取待测样品总RNA；

(2)设计并合成引物；

(3)RT-PCR

a.反转录合成cDNA，以鸽I型副粘病毒总RNA为模板，以SPLVGV-2引物，通过反转录酶合成cDNA

b.PCR扩增，以cDNA为模板，以SPLVGV-1和SPLVGV-2为引物，进行PCR反应；

(4)电泳检测

吸取2.5μL RT-PCR产物进行0.8-1.5％的琼脂糖凝胶电泳，经核糖染色Goldview，通过凝胶成像仪观察，在感染该鸽I型副粘病毒病的样品中有895bp的核酸条带。

进一步的，所述步骤(1)中总RNA提取法采用的是多糖多酚组织的裂解法。

进一步的，所述步骤(3)中PCR扩增阶段的反应条件为：94℃预变性5min；94℃变性1min；54℃退火1min；72℃延伸1min，共进行35个循环，72℃延伸7min，4℃保存。

有益效果：本发明提供了一种在检测鸽I型副粘病毒病鉴别诊断的试剂盒与检测方法，利用RT-PCR方法检测鸽I型副粘病毒病，克服了分离鸽I型副粘病毒病核酸的繁琐步骤，节省时间，大大提高了检测的可操作性、灵活性和可重复性，为鸽I型副粘病毒病的检测提供了有效方法。