[发明专利]一种宽检测范围的尿液转铁蛋白检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种宽检测范围的尿液转铁蛋白检测试剂盒，所述试剂盒包括试剂一和试剂二，所述试剂一包括金属离子添加剂，所述金属离子添加剂为锌盐，所述锌盐的浓度为6‑19mM；所述试剂二为标记有UTRF抗体的胶乳颗粒溶液，所述胶乳颗粒粒径范围为172‑200nm。本发明中的试剂盒线性范围上限超过80mg/L，能够涵盖90％以上病患，且在2mg/L参考值附近的重复性好，利于灰区样本判断；此外，本发明中的试剂盒可以替代进口试剂，节约病患开支。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种宽检测范围的尿液转铁蛋白检测试剂盒。

背景技术

转铁蛋白(UTRF)是带负电荷的小分子循环蛋白，在生理状态下转铁蛋白和白蛋白都很难通过肾小球滤膜，但是当肾脏发生病变时，转铁蛋白和白蛋白可从肾小球中漏出，故尿转铁蛋白是一项反映肾小球滤膜损伤的灵敏指征。转铁蛋白的独特性不仅使其具有检测常规肾功能特性，而且还能更广泛地应用于更早期，更轻微肾损伤的检测。

正常成人尿液中转铁蛋白含量较低，通常2mg/L，但是正常成人血液中转铁蛋白含量高达2200-4000mg/L，当肾小球出现轻微损伤时，血液中转铁蛋白将漏到尿液中，使得尿液中的UTRF明显升高；其中，中后期肾病病患，UTRF漏出更多，使得尿液中的UTRF浓度高达几百甚至1000mg/L。目前临床常用检测血液转铁蛋白的免疫比浊法试剂，因为灵敏度问题无法检测尿液转铁蛋白。现市面上已经有多家公司拥有测定尿液UTRF的试剂，除西门子和贝克曼库尔特的进口尿液转铁蛋白检测试剂外；美康生物，北京百奥泰康生物以及本公司均采用胶乳免疫比浊法，其中美康生物，北京百奥泰康生物以及本公司试剂的检测下限均能达到0.6mg/L以下，但是在这些试剂中，线性范围最高的仅达到30mg/L，并且多数厂家还未标注抗原过剩范围。

在临床应用中，现有的胶乳免疫比浊试剂具有线性范围过窄的问题，研究发现，50％以上的早期肾小球肾病患，其尿液中的UTRF均会超过30mg/L，只有不到10％的早期肾小球肾病患尿液中的UTRF会超过80mg/L。因此，现有的利用胶乳免疫比浊法试剂，检测尿液中UTRF的试剂盒，根本无法满足大多数早期肾小球肾病患尿液中UTRF含量的检测，而大量标本利用人工或者仪器稀释复检，既增加了医院工作人员的劳动强度又增加了试剂损耗成本。

目前，检测尿液中UTRF含量的主流试剂为进口的西门子BNII(2.2-35mg/L)系统的UTRF试剂，以及贝克曼库尔特(BC)IM800(2.0-40mg/L)系统中的UTRF试剂，两者均采用散射免疫比浊法，虽然其检测范围相对较宽，能够达到35-40mg/L，覆盖了60％的病患，但是其检测低限仅能达到2.2和2.0mg/L。由于小于最低检测限的样本无法报告结果，而此项目的参考值则为2mg/L，致使临床应用相对尴尬，灰区样本无法检测出结果，弱阳性样本(尿液中UTRF含量为2.0-5mg/L)测定重复性差。此外，进口试剂价格昂贵，而且现有的检测尿液中UTRF的试剂盒，检测速度极为缓慢，均小于250t/h，无法适应大型医院病患多以及体检海量样本的需求。

基于现有的UTRF胶乳比浊试剂，通过仪器预稀释方式，拓展检测范围，将降低50％-70％的生化仪检测速度，相对现有西门子和BC试剂，此方法检测速度的提升并不明显，且该方式拓展检测范围的能力有限，仅能达到50-60mg/L，并不能达到线性范围上限超过80mg/L的要求。此外，大幅度提高抗体用量，虽然可以用来拓宽试剂线性范围，但是单纯提高抗体用量，不仅会对抗原过剩范围造成不利的影响，而且还会大幅度提升检测成本，在国家严控医疗费用的背景下，大幅度提高抗体用量来拓宽试剂线性范围的方法，显然是无法推广使用的。

因此，提供一种线性范围上限超过80mg/L，能够涵盖90％以上病患，且在2mg/L参考值附近重复性好，利于灰区样本判断的国产尿液转铁蛋白检测试剂盒，是本领域技术人员亟需解决的问题。

发明内容