[发明专利]用于检测犬细小病毒抗原的免疫荧光层析检测卡与制备方法

说明书

本发明公开了一种用于检测犬细小病毒抗原的免疫荧光层析检测卡与制备方法；旨在提供一种灵敏度高，检测结果可靠的用于检测犬细小病毒抗原的免疫荧光层析检测卡；其技术要点包括底板，在底板上依次衔接有样品垫、结合垫、硝酸纤维膜和吸水垫,所述结合垫上设有荧光微球标记的CPV单克隆抗体和荧光微球标记的羊抗鸡IgY，所述的硝酸纤维膜设有一条包被鸡IgY的质控C线，以及一条包被抗CPV单克隆抗体的检测T线；属于动物疫病检测领域。

技术领域

本发明公开了一种免疫荧光层析检测卡，具体地说，是一种用于检测犬细小病毒抗原的免疫荧光层析检测卡，本发明还公开了该免疫荧光层析检测卡的制备方法。

背景技术

犬细小病毒(CPV)主要感染犬，尤其幼犬，传染性极强，死亡率也高。一年四季均可发病，以冬、春多发。饲养管理条件骤变，长途运输，寒冷，拥挤均可促使本病发生。病犬是主要传染源，呕吐物、唾液、粪便中均有大量病毒。康复犬仍可长期通过粪便向外排毒。有证据表明人、虱、苍蝇和蟑螂可成为CPV的机械携带者。健康犬与病犬或带毒犬直接接触，或经污染的饲料和饮水通过消化道感染。

临床上可根据血常规检测结果和本病的主要症状进行初步诊断。血常规检测红细胞压积增加，白细胞值正常或偏低，常提示病毒病。病犬排泄番茄汁样或酱油样带腥臭气味的血便是本病的特征性症状，可作为初诊依据。

目前，最常应用的检测犬细小病毒(CPV)的方法是血凝(HA)和血凝抑制试验(HI)及ELISA方法。其中HA试验最为经济，但是也存在缺点，一方面获取造价昂贵新鲜的红细胞比较困难，另一方面，该方法只适用于CPV感染后期样本检测，不适应近年来早期、快速检测的要求。ELISA方法则应用较多，但操作要求较高，并且还需要酶标仪判定结果，因此不适于基层使用。

中国专利201310705249.8提供一种用于检测犬细小病毒的胶体金试纸条，所述胶体金试剂条包含：包被犬细小病毒抗原的多克隆抗体和二抗IgG两个条带的硝酸纤维膜；含有胶体金标记犬细小病毒抗原的单克隆抗体的玻璃纤维膜。但是该方法采用自制的犬细小病毒抗原的多克隆抗体作为包被抗体，可能存在与其他同类病毒的交叉反应，特异性欠佳。另外该专利采用传统的胶体金层析技术，免疫标记物依靠静电吸附，存在灵敏度较低、难以定量、重复性和稳定性较差等缺陷，无法完全满足临床的检测需求。

发明内容

针对上述问题，本发明的目的是提供一种灵敏度高，检测结果重现性的用于检测犬细小病毒抗原的免疫荧光层析检测卡。

本发明的第二个目的是提供上述检测试剂卡的制备方法。

为此，本申请提供的第一个技术方案是这样的:

一种用于检测犬细小病毒抗原的免疫荧光层析检测卡，包括底板，在底板上依次衔接有样品垫、结合垫、硝酸纤维膜和吸水垫,所述结合垫上设有荧光微球标记的CPV单克隆抗体和荧光微球标记的羊抗鸡IgY，所述的硝酸纤维膜设有一条包被鸡IgY的质控C线，以及一条包被CPV单克隆抗体的检测T线。

进一步的，上述的一种用于检测犬细小病毒抗原的免疫荧光层析检测卡，还包括样品稀释瓶。

进一步的，上述的一种用于检测犬细小病毒抗原的免疫荧光层析检测卡，所述样品稀释瓶内装有样品稀释液，所述样品稀释液为含0.8％S21、0.03％Proclin 300的0.01M的pH7.4磷酸盐缓冲液。

本申请提供的第二个技术方案是这样的：

一种用于检测犬细小病毒抗原的免疫荧光层析检测卡的制备方法，在底板上依次衔接有样品垫结合垫、硝酸纤维膜和吸水垫，其中：

A)所述的样品垫的制备方法为：

1)配制样品垫处理液：含1％BSA、0.1％S9和0.05％Proclin 300的0.2M pH9.0硼酸盐缓冲液；