[发明专利]从茶叶中制备槲皮素-3-O-葡萄糖鼠李糖葡萄糖苷的方法

说明书

本发明公开了一种从茶叶中制备槲皮素‑3‑O‑葡萄糖鼠李糖葡萄糖苷的方法，包括以下步骤：(1)、将茶叶加水浸提，过滤，得茶叶提取液；(2)、将茶叶提取液进行聚酰胺柱色谱分离，得到粗产品溶液；梯度洗脱条件为：水→15％甲醇水溶液→粗品提取溶剂→纯甲醇；粗品提取溶剂洗脱收集得到的洗脱液经浓缩后即得到粗产品溶液；(3)、将粗产品溶液进行制备色谱分离，收集组分，得到槲皮素‑3‑O‑葡萄糖鼠李糖葡萄糖苷溶液；(4)将步骤(3)中所得到的溶液经减压浓缩，冷冻干燥，得到槲皮素‑3‑O‑葡萄糖鼠李糖葡萄糖苷。采用本发明的方法可从茶叶中大量分离纯化得到该化合物。

技术领域

本发明涉及茶叶中的有效成分的提取制备方法，具体涉及一种从茶叶中制备槲皮素-3-O-葡萄糖鼠李糖葡萄糖苷的方法，属于化合物制备技术领域。

背景技术

茶树是多年生常绿叶用作物。在茶的鲜叶中，水分约占75％，干物质为25％左右。到目前为止，茶叶中经分离、鉴定的已知化合物有1400多种，其中茶多酚、氨基酸、生物碱是影响茶叶品质的三类重要物质。茶多酚类亦称“茶鞣质”、“茶单宁”，是一类存在于茶树中的多元酚的混合物，主要包括儿茶素类、黄酮及黄酮醇类、花青素及花白素类和酚酸及缩酚酸类。其中，黄酮及黄酮醇类是一类广泛存在自然界的黄色色素，在干茶中的含量约为3-4％，带苦涩味，对绿茶汤色的影响较大。

自从20世纪50年代Nakabayashi等人首次在茶叶中发现了黄酮及其苷类物质，针对茶叶中黄酮类物质的研究就此展开。早期，茶叶中黄酮类化合物的分离主要使用纸层析(PC)、薄层层析(TLC)等手段。液相色谱、质谱、光电二极管阵列检测、核磁共振等检测技术的发展和在茶叶领域的应用使茶叶黄酮分离、检测的同时进行成为了一种可能。随后，超高效液相色谱的应用使茶叶中黄酮类物质的分离迈上了更快、更好的新台阶。但是由于茶叶中黄酮类物质的含量以及分离手段的局限性，目前尚未得到茶叶中全部黄酮醇苷类物质的标准品，这对茶叶中黄酮类物质的进一步研究造成了一定的困难。

槲皮素-3-O-葡萄糖鼠李糖葡萄糖苷，即，槲皮素-3-O-[β-葡萄糖-(1→3)-α-鼠李糖-(1→6)-β葡萄糖]，在已经公开的《Flavonol Glycosides in Tea-Kaempferol andQuercetin Rhamnodiglucosides》中有明确告知。

槲皮素-3-O-葡萄糖鼠李糖葡萄糖苷，目前现有的制备方法为：称取20g茶叶用纯甲醇以1:50茶水比浸提一次(15min,40℃)，70％甲醇溶液以1：20茶水比浸提两次。上清液蒸发浓缩至100mL，并用去离子水定容到200mL。将茶汤用聚酰胺柱(20cm×3cm id)层析进行预处理。聚酰胺事先用纯甲醇溶胀，并用500mL去离子水冲洗。茶汤上样50mL，首先用250mL去离子水洗去糖类和矿物质，弃去洗脱液；再用500mL纯甲醇洗脱黄酮醇苷，将洗脱液浓缩至近足干，转移后用水定容至10mL。使用Nucleosil C18 5um的制备色谱柱，采用0.2％乙酸(A相)和纯乙腈(B相)作为流动相，洗脱方法如下：(1)A:B＝85:15,12ml/min；(2)A:B＝87:13,16ml/min；(3)A:B＝82:18,12ml/min，收集对应时间产物，真空冻干得到黄酮醇苷纯品粉末。

上述方法需要使用制备色谱进行3次分离后才能得到槲皮素-3-O-葡萄糖鼠李糖葡萄糖苷纯品，耗时长；不利于大量制备。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种从茶叶中制备槲皮素-3-O-葡萄糖鼠李糖葡萄糖苷的方法。

为了解决上述技术问题，本发明提供一种从茶叶中制备槲皮素-3-O-葡萄糖鼠李糖葡萄糖苷的方法，包括以下步骤：

(1)、将茶叶加水浸提，过滤，得茶叶提取液；

(2)、将茶叶提取液进行聚酰胺柱色谱分离，得到粗产品溶液；