[发明专利]中华鳖胶原蛋白肽的制备方法及其应用

权利要求书

1.中华鳖胶原蛋白肽的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

S1.粉碎：取中华鳖组织粉碎；

S2.碱液除杂蛋白：将步骤S1所得中华鳖组织置于NaOH溶液中浸泡；

S3.醇除脂肪：取步骤S2所得中华鳖组织洗涤，沥干后置于乙醚溶液中浸泡；

S4.热水浸提：取步骤S3所得中华鳖组织经蒸馏水洗涤，沥干后加入中华鳖组织质量15～25倍的水，温度升高至90～110℃加热10～20min，冷却；

S5.酶解：取步骤S4热水浸提后的中华鳖组织混合液，调pH为7～7.5，加入木瓜蛋白酶搅拌酶解，过滤得滤液；

S6.离心：将步骤S5所得滤液离心得上清液即为粗胶原蛋白；

S7.盐析：取步骤S6所得粗胶原蛋白加入NaCl析出絮状沉淀，离心得沉淀物，用冰醋酸重新溶解，重复盐析，再次离心得沉淀物为胶原蛋白；

S8.透析：将步骤S7所得胶原蛋白采用乙酸溶解，并用乙酸作为透析液进行透析。

2.根据权利要求1所述的中华鳖胶原蛋白肽的制备方法，其特征在于，透析结束后还包括二次酶解和离子交换层析步骤，二次酶解步骤为取步骤S8所得中华鳖组织胶原蛋白，按胶原蛋白质量10～15倍添加pH为7.4浓度为0.1mol/L的磷酸盐缓冲液，再加入250～300U/g木瓜蛋白酶，并在50℃下搅拌5～7h，冷冻干燥后备用；离子交换层析步骤为取二次酶解后的中华鳖组织胶原蛋白，按料液比10:1mg/ml溶解于0.05mol/L、pH6的tris缓冲液，0～1mol/L条件下进行线性梯度洗脱，流速为1ml/min，接取出峰样品，冷冻干燥后即得高抗氧化中华鳖组织胶原蛋白肽。

3.根据权利要求2所述的中华鳖胶原蛋白肽的制备方法，其特征在于，当透析结束后还包括二次酶解和离子交换层析步骤时，省略所述步骤S4。

4.根据权利要求1所述的中华鳖胶原蛋白肽的制备方法，其特征在于，所述步骤S1中中华鳖组织为中华鳖背甲，粉碎前先采用骨钳钳成块并置于液氮浸泡，粉碎后放入-20℃保存备用。

5.根据权利要求1所述的中华鳖胶原蛋白肽的制备方法，其特征在于，所述步骤S2中NaOH溶液质量为中华鳖组织质量的15～25倍，NaOH溶液浓度为0.05～0.15mol/L，浸泡温度为15～20℃，浸泡时间为3～5h；所述步骤S3中乙醚溶液质量为中华鳖组织质量的15～25倍，乙醚溶液质量浓度为10％，浸泡温度为15～30℃，浸泡时间为24h。

6.根据权利要求1所述的中华鳖胶原蛋白肽的制备方法，其特征在于，所述步骤S5中木瓜蛋白酶加入量为250～300U/g，50℃下搅拌5～7h。

7.根据权利要求1所述的中华鳖胶原蛋白肽的制备方法，其特征在于，所述步骤S6～S7中离心条件为3～5℃，以8000～10000×g离心25～35min。

8.根据权利要求1所述的中华鳖胶原蛋白肽的制备方法，其特征在于，所述步骤S7中加入NaCl至NaCl溶液浓度为0.8～1.0mol/L；冰醋酸溶液浓度为0.5mol/L。

9.根据权利要求1所述的中华鳖胶原蛋白肽的制备方法，其特征在于，所述步骤S8中透析用乙酸浓度为0.05～0.1mol/L，透析时间为72h，每6～10h更换一次乙酸透析液，冷冻干燥后至-20℃保存待用。

10.根据权利要求1～9任一项所述的制备方法所得的中华鳖胶原蛋白肽在制备具有抗氧化功能的药品、保健品、护肤美容用品中的应用。