[发明专利]一种抗蓖麻毒素免疫球蛋白F(ab’)2

说明书

本发明公开了一种抗蓖麻毒素免疫球蛋白F(ab’)2及其制备方法。本发明提供了一种制备抗蓖麻毒素免疫球蛋白F(ab’)2的方法，包括如下步骤：用免疫原免疫动物，制备蓖麻毒素IgG抗体，再将所述蓖麻毒素IgG抗体去除Fc段，得到抗蓖麻毒素免疫球蛋白F(ab’)2；所述免疫原的抗原为如下：1)、低毒或减毒蓖麻毒素突变体或其重组蛋白；2)编码所述低毒或减毒蓖麻毒素突变体或其重组蛋白的DNA分子或表达所述DNA分子的载体、表达盒、重组菌或重组病毒；3)脱毒的天然蓖麻毒素。本发明利用无毒或低毒的蓖麻毒素抗原免疫健康动物，产生高效价中和蓖麻毒素的抗血清,对蓖麻毒素的治疗和预防有特异性保护效果。

技术领域

本发明属于生物制药领域，涉及一种抗蓖麻毒素免疫球蛋白F(ab’)₂及其制备方法。

背景技术

蓖麻毒素(ricin)是来源于植物蓖麻种子中的一种高毒性糖蛋白，ricin对小鼠的腹腔半数致死剂量(LD50)约为3-8μg/kg，对成年人的致死剂量约为150μg，其毒性相当于氰化物毒性的6000倍左右。蓖麻毒素是具有两条肽链的高毒性的植物蛋白，该毒素易损伤肝、肾等实质器官，发生出血、变性、坏死病变。并能凝集和溶解红细胞，抑制麻痹心血管和呼吸中枢，是致死的主要原因之一。蓖麻毒素的来源容易、提取简单，易获得，难以监管，易造成社会危害，历史上曾有多次恐怖分子利用蓖麻毒素制造恐怖事件。1993年的化学武器公约将RT确定为一类化学品。其毒性取决于剂量、接触途径、摄入、肌肉注射或吸入能产生不同的毒性作用。RT的毒性作用具有明显的剂量依赖性，高剂量RT主要表现为抑制蛋白质合成，低剂量主要表现为诱导细胞因子的产生、诱发细胞凋亡。

20世纪70年代蓖麻毒素的一级结构测定已完成，由A、B两条链组成，两链间由一个二硫键连接。当毒素进入体内，A、B两条链分开。A链通过渗透经细胞膜进入细胞浆，主要使真核细胞的核糖体抑制失活，从而抑制蛋白质的合成。B链与细胞表面结合，通过内陷作用转入细胞内，它能促使A链进入胞浆。

根据人类历史与毒素斗争的经验，最有效而经济的手段之一是抗血清的被动免疫治疗，在某些重要毒素的治疗和预防上至今仍被使用，发挥重要的作用。抗血清(又名抗免疫球蛋白)自古以来是用于重要毒素的一种有效的应急措施，至今多种抗血清在临床广泛应用，发挥重要的治疗和预防毒素的作用。抗血清发展经历了传统的整个抗体分子，发展到今天有效去掉能引起毒副作用的Fc段抗体分子和其它血浆杂蛋白分子，获得具有与毒素抗原特异结合的高纯度F(ab’)₂治疗抗体，达到中和毒素的效果。

发明内容

本发明一个目的是提供一种制备抗蓖麻毒素免疫球蛋白F(ab’)₂的方法。

本发明提供的方法，包括如下步骤：用免疫原免疫动物，制备蓖麻毒素IgG抗体，再将所述蓖麻毒素IgG抗体去除Fc段，得到抗蓖麻毒素免疫球蛋白F(ab’)2；

所述免疫原包括低毒或减毒的蓖麻毒素抗原。

上述方法中，所述低毒或减毒的蓖麻毒素抗原的LD₅₀小于等于3.15μg/kg体重。

上述方法中，所述低毒或减毒的蓖麻毒素抗原为如下1)-3)中任一种：

1)、脱毒的天然蓖麻毒素；

2)、低毒或减毒蓖麻毒素突变体或其重组蛋白；

3)、编码所述低毒或减毒蓖麻毒素突变体或其重组蛋白的DNA分子或表达所述DNA分子的载体、表达盒、重组菌或重组病毒；

上述方法中，所述脱毒的天然蓖麻毒素的纯度大于等于90％；

或，所述低毒或减毒蓖麻毒素突变体为低毒或减毒的蓖麻毒素A链突变体；

或，所述低毒或减毒的蓖麻毒素A链突变体为定点突变修饰的低毒或减毒的蓖麻毒素A链突变体；