[发明专利]基于基因组DNA红外光谱的肉骨粉种属检测方法及系统

说明书

本发明提供一种基于基因组DNA红外光谱的肉骨粉种属检测方法及系统，所述方法包括：1)提取已知来源的不同种属肉骨粉样品的基因组DNA；2)采集上述DNA样品的红外光谱信息；3)将采集的红外光谱信息与DNA样品的种属来源信息进行关联，建立肉骨粉的种属判别分析模型；4)按照步骤1)的方法提取待测肉骨粉样品的基因组DNA，然后按照步骤2)的方法采集待测DNA样品的红外光谱信息，代入上述判别分析模型中，获取待测肉骨粉样品的种属来源信息。本发明提供的基于基因组DNA红外光谱的肉骨粉种属检测方法及系统，显著提高了肉骨粉的种属检测精度与检测效率。

技术领域

本发明涉及饲料检测技术领域，具体地说，涉及一种基于基因组DNA红外光谱的肉骨粉种属检测方法及系统。

背景技术

肉骨粉是一种重要的动物源性饲料，具有蛋白含量丰富及生物学价值高等特点，曾在养殖领域广泛使用，但随后爆发的疯牛病使肉骨粉遭到控制甚至禁用。欧盟从2001年开始颁发法规，禁止在反刍动物、猪、禽和鱼类饲料中添加任何来源的肉骨粉和禁止动物源性饲料成分的种内循环和同类相食，但在2013年欧盟解除水产饲料中的非反刍源的禁用。这说明为了饲料产业的可持续发展和循环利用，科学可靠的检测技术是确保法律法规实施的重要保证，逐步细化至不同种属之间是否相互饲用是动物源性饲料禁用法律法规的必然发展趋势，这也必将对不同种属动物源性饲料的检测技术提出更高的要求。

诸多学者采用不同技术手段，研究肉骨粉种属鉴别方法，均尚处于研究阶段，各有其局限性。目前，国际上的官方方法是显微镜法和实时荧光定量聚合酶链反应法(qPCR)，其中显微镜法很难实现肉骨粉种属鉴别(猪源、鸡源和反刍源)。qPCR法是以脱氧核糖核酸(DNA)为基础，针对物种间特异性DNA片段设计引物，是目前唯一可实现不同种属肉骨粉鉴别分析的一种官方方法。但该方法分析费用高，检测时间长，检测环境要求严格，而且在检测过程中样品一旦发生微生物污染，就会严重影响检测结果的准确性。从技术角度分析，为突破qPCR方法的局限性，开发建立基于基因组DNA的检测方法是可行且必要的。

傅里叶变换红外光谱具有快速、高灵敏度和样品用量小等优点，能反映DNA分子的化学键振动，对DNA分子组成和结构进行“指纹”识别。因此基于基因组DNA的红外光谱肉骨粉种属鉴别具有理论可行性。

发明内容

本发明的目的是提供一种基于基因组DNA红外光谱的肉骨粉种属检测方法及系统。

为了实现本发明目的，本发明基于基因组DNA红外光谱的肉骨粉种属检测方法，包括以下步骤：

S1、提取已知来源的不同种属肉骨粉样品的基因组DNA，配制成DNA样品溶液；

S2、采集上述DNA样品溶液的红外光谱信息；

S3、将采集的红外光谱信息与DNA样品的种属来源信息进行关联，建立肉骨粉的种属判别分析模型；

S4、按照步骤S1的方法提取待测肉骨粉样品的基因组DNA，配制成待测DNA样品溶液；然后按照步骤S2的方法采集待测DNA样品溶液的红外光谱信息，代入上述判别分析模型中，获取待测肉骨粉样品的种属来源信息。

前述的方法，步骤S1所得DNA样品溶液的A260/A280在1.8-2.0之间，浓度≥100ng/μL。优选地，DNA样品溶液的浓度为100ng/μL。

前述的方法，步骤S2具体操作如下：取15μL DNA样品溶液滴于微孔板上，干燥成膜；然后用带有高通量筛选附件HTS-XT的傅里叶红外光谱仪扫描，光谱扫描范围为4000cm^-1-400cm^-1，分辨率为4cm^-1，扫描次数≥32次。

优选地，干燥的温度为20-70℃。更优选20-40℃。最优选30℃。

优选地，扫描次数为64-256次。更优选64次。