[发明专利]猪圆环病毒3型病毒样颗粒的制备方法及其应用

权利要求书

1.猪圆环病毒3型病毒样颗粒的制备方法制备的猪圆环病毒3型病毒样颗粒在制备猪圆环病毒3型免疫剂中的应用，所述的应用包括下述步骤：

1）以f：5'-TATGGATCCACCGCGGGTACCTACTACACCA-3'和r：5'-GCGGCAAGCTTTTACAGAACGCTTTTGTAACGA-3'为上下游引物，以合成的PCV3-cap181为模板进行扩增；扩增产物和pET28a-SUMO经BamH I 和Hind III双酶切后回收、连接，产物转化到E.coli DH5ɑ感受态细胞，挑菌鉴定后抽提质粒，重组质粒命名为pET28a-8his×SUMO-cap181;

所述的PCV3-cap181基因的核苷酸序列为SEQ ID NO. 1所示;

2）将pET28a-8his×SUMO-cap181质粒转入大肠杆菌表达菌株Rosetta(DE3)，命名为Rcap181;

3）Rcap181菌液接种到含卡那霉素的液体LB培养基中，37℃，200rpm摇床上培养3~4 h，使OD₆₀₀的值达到0.6；然后加入终浓度为0.1 mmol/L的IPTG，37℃，200rpm进行诱导表达3~4小时，随后离心收集菌液；

4）破碎3）中收集的菌液的菌体，收集上清后过柱纯化，将初纯蛋白放入透析袋中透析后，切除SUMO标签，即得CAP蛋白；

5）CAP蛋白置于缓冲液A中透析12~24 h；透析完成后，即得猪圆环病毒3型病毒样颗粒；

所述的缓冲液A 的配方： 0.1 M 磷酸氢二钠、0.1 M 磷酸二氢钠、500 mM氯化钠、10mMTris、50 mM氯化钾、2 mM氯化镁、5%的甘油、pH6.5。