[发明专利]一种当归蛋白在制备辅助肿瘤治疗药物中的应用

说明书

本发明涉及天然中药蛋白领域，更具体地涉及一种当归蛋白在制备辅助肿瘤治疗药物中的应用；所述当归蛋白N端序列为GIQKTEVEAPSTVSA。所述当归蛋白用于制备辅助肿瘤治疗药物，化疗前给予当归蛋白可以减轻化疗药物顺铂对小鼠脾脏的损伤；放射治疗前给予当归蛋白，可使受照小鼠的外周血白细胞数量、胸腺指数、脾脏指数、脾结节数量（CFU‑S）和脾脏的CAT活力分别显著增加135%、103%、23%、219%和180%，还可提升受照鼠脾脏的GST和GSH‑Px活力，改善脾白髓损伤，其整体保护效果强于阿米福汀，可使受照鼠体重下降率显著减少了94%，从而提高其生存质量。

技术领域

本发明涉及天然中药蛋白领域，更具体地涉及一种当归蛋白在制备辅助肿瘤治疗药物中的应用。

背景技术

化疗药物顺铂（DDP）是以铂为基础的具有临床活性的广谱抗癌特效药之一，但因其选择性不高，对肿瘤细胞有强大的杀伤作用外，也可抑制以脾脏为代表的免疫系统。

放射治疗是杀灭肿瘤的行之有效的手段，承担着2/3肿瘤病人的治疗。但因放疗产生的自由基引起的辐射损伤副作用大，严重削弱了机体局部和整体的抵抗力，患者往往会因为这些副作用的发生而被迫中断放疗。所以肿瘤放疗副作用的防治将直接影响着放疗能否持续，是决定最终能否彻底根治肿瘤的主要因素之一，日益受到人们的关注和重视。

阿米福汀（AMFT）又名WR-2721，是唯一被批准应用于临床的放射防护剂。在放疗前预先使用阿米福汀，可明显减轻化疗药物所产生的肾脏、骨髓、心脏、耳及神经系统的毒性。但在临床使用过程中，阿米福汀逐渐被发现具有较大的毒性，会使大部分患者出现头晕、恶心、呕吐等不良反应。由于阿米福汀价格昂贵，使用后的副作用却不少，近年来其临床使用逐渐减少，甚至退出临床使用。因此，市场急需开发新的化疗与放射防护剂。

当归[Angelica sinensis（Oliv.）Diels]是伞形科当归属的一种多年生草本植物，活血补血之良药，其根可入药材，甘温质润。当归做为我国著名的中草药之一，被尊称为“药王”，对循环系统、呼吸系统、造血系统、免疫系统以及神经系统等均具有一定的功效。当归总蛋白具有清除DPPH自由基能力，且既在极显著促进正常肝细胞L-02的增殖（P0.01）的同时，又能极显著抑制白血病细胞K562的增殖（P0.01）。

本发明从中药当归中得到当归PR-10家族蛋白——ASPR。病程相关蛋白-10家族（PR-10）蛋白广泛分布于各种属以及植物各器官中，属于植物抗逆蛋白，与植物抵抗生物胁迫（病原体）与非生物胁迫（干旱，热量，寒冷和盐分）的能力有关。

本发明提供了当归蛋白及其在制备辅助肿瘤治疗药物中的应用。

发明内容

本发明的目的是提供一种当归蛋白在制备辅助肿瘤治疗药物中的应用，以开发新的化疗与放疗防护剂。

为解决上述问题，本发明采取的技术方案如下：

所述当归蛋白的制备方法为：

以10倍体积0.05 mol/L Tris-HCl缓冲液 （pH 8.0） 浸泡当归饮片，4 ℃抽提过夜，次日用4层纱布过滤残渣，滤液于12000 rpm、4 ℃离心10min，收集上清。将所得的上清进行80%硫酸铵沉淀，收集沉淀，溶于2倍体积的0.05 mol/L Tris-HCl缓冲液（pH8.0）中，经Sephadex G-50层析柱分离，收集第二个洗脱峰，即为目的蛋白ASPR，分子量为18.33 kDa，经测序获得N端序列为GIQKTEVEAPSTVSA。所述当归蛋白可用于制备防治放射损伤药物。

所述当归蛋白的使用浓度为0.5-2 mg/mL；将无菌过滤过的当归ASPR蛋白以无菌的PBS或生理盐水稀释至使用浓度。使用方法为给予顺铂或放射治疗前连续肌肉注射或静脉注射当归ASPR蛋白3 d，每次0.5 mL。

本发明的优点在于：