[发明专利]一种发酵法生产的十二碳二元酸产品及其制备方法

权利要求书

1.一种发酵法生产的十二碳二元酸产品，其特征在于，十四碳二元酸杂质含量低于或等于0.15wt％；优选地，低于或等于0.1wt％；所述十四碳二元酸杂质含量是所述十四碳二元酸占所述发酵法生产的十二碳二元酸产品的质量百分数。

2.一种如权利要1所述的十二碳二元酸产品的发酵生产方法，包括发酵过程，所述发酵过程通过热带假丝酵母(Candida tropicalis)或清酒假丝酵母(Candida sake)利用发酵培养基发酵，将底物转化为十二碳二元酸，所述底物包括或者是十二碳正构烷烃、直链饱和脂肪酸、直链饱和脂肪酸酯和直链饱和脂肪酸盐中的一种或多种；其特征在于：在所述发酵过程中控制所述底物浓度低于5％(v/v)，优选低于2％(v/v)；进一步，在所述发酵过程的转化期控制所述底物浓度低于5％(v/v)，优选低于2％(v/v)，所述底物浓度是指所述底物占发酵液的体积百分比浓度。

3.如权利要求2所述的一种十二碳二元酸产品的发酵生产方法，其中，

所述发酵过程控制温度28～32℃，通风比为0.3～0.7vvm，罐压(表压)为0.05～0.14MPa，保持一定的搅拌速度以控制溶氧大于等于10％，优选10％～70％，更优选40％～70％；发酵起始pH为5.0-7.0，待稀释30倍后菌体光密度OD₆₂₀大于0.5时，进入转化期开始批次加入所述底物，控制pH为5.0-8.0。

4.如权利要求2所述的一种十二碳二元酸产品的发酵生产方法，其中，所述发酵过程包括以下步骤：

将种子液接种到含有发酵培养基的发酵罐中，接种后起始体积为4～6L，接种量10％～30％(v/v)，发酵起始添加0～10％(v/v)的所述底物，所述发酵过程控制温度28～32℃，通风比为0.3～0.7vvm，罐压为0.05～0.14MPa，所述罐压是表压，保持一定的搅拌速度以控制溶氧大于等于10％，优选10％～70％，更优选40％～70％；发酵起始pH为5.0-7.0，待菌体光密度(OD₆₂₀)大于0.5(稀释30倍)时，进入转化期开始批次加入所述底物，控制pH为5.0-8.0,控制发酵液中烷烃含量不超过5％(v/v)，优选不超过2％(v/v)，总发酵周期约为100～180小时。

5.如权利要求2-4任一项所述的一种十二碳二元酸产品的发酵生产方法，其中，还包括获得种子液的过程，所述获得种子液的过程包括以下步骤：

取摇瓶种子接入装有种子培养基的种子罐中，接种量为10％～30％，接种后发酵体系的起始pH值为6.0～6.8，28～32℃下，通风比0.3～0.7vvm，罐压0.05～0.14MPa，保持一定的搅拌速度以控制种子培养过程的DO大于等于10％，优选10％～70％，更优选40％～70％，培养15～30h；

优选地，菌体在种子罐中培养，培养成熟种子的标准为稀释30倍后菌体光密度OD₆₂₀为0.5～1.0。

6.如权利要求2-5任一项所述的十二碳二元酸产品的发酵生产方法，其中，还包括菌种活化的过程，所述菌种活化的过程包括以下步骤：

取热带假丝酵母的甘油管菌种接种于装有YPD培养基的种子瓶中，pH自然，28～32℃下，200～250rpm摇床培养1～2天。