[发明专利]一种当归蛋白自组装颗粒及应用

说明书

本发明涉及天然中药蛋白领域，更具体地涉及一种当归蛋白（ASPR）及其蛋白自组装纳米颗粒，该蛋白N端序列为GIQKTEVEAPSTVSA。ASPR蛋白在pH 8.0下，经过100℃加热15min，可自组装形成纳米颗粒。通过100 KDa超滤分离得到的蛋白自组装纳米颗粒ASPR‑NP平均粒径为154.9±27.2 nm。该纳米颗粒稳定性好，可跨膜进入细胞，到达线粒体。此外，ASPR可包埋小分子难溶药物阿魏酸（FA），得到ASPR‑FA‑NP，其平均粒径为216.3±18.3 nm。ASPR‑FA‑NP的稳定性好，能够选择性促进正常肝细胞增殖同时抑制肝癌细胞增殖，且生物相容性好。

技术背景

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种当归蛋白自组装颗粒及应用，当归蛋白自组装颗粒稳定性与生物安全性佳，并可应用于包埋水溶性差的小分子，以改善难溶小分子的生物利用度。

背景技术

病程相关蛋白-10家族（PR-10）蛋白广泛分布于各种属以及植物各器官中，属于植物抗逆蛋白，与植物抵抗生物胁迫（病原体）与非生物胁迫（干旱，热量，寒冷和盐分）的能力有关。

我国传统中药当归为多年生草本植物当归[Angelica sinensis (Oliv.) Diels]的干燥根，本发明从中药当归中制备得到当归PR-10家族蛋白——ASPR，发现其在一定的温度、pH及处理时间下，可自组装形成蛋白质纳米颗粒ASPR-NP，ASPR-NP纳米颗粒低温下稳定性好，可跨膜进入细胞且具有良好的生物安全性。

阿魏酸（4-羟基-3-甲氧基肉桂酸，FA）是一种有效的抗氧化剂，在疾病防治（如阿尔茨海默氏病，糖尿病，癌症，高血压和动脉粥样硬化等）、化妆品行业（FA能使皮肤有效地避免光照）和食品行业（可抑制脂质过氧化和随后的氧化腐败）等均有广泛应用。

FA有顺式、反式两种，顺式为黄色油状物，反式为正方形结晶或纤维结晶。应用上常用反式FA，常温下，反式FA难溶于水，只溶于热水和有机溶剂。水溶解性差导致FA的使用受到很多限制，影响其生化功能的发挥。

本发明制备得到ASPR蛋白，还可装载FA形成ASPR-FA-NP纳米颗粒，增加其水溶性，ASPR-FA-NP可选择性促进正常肝细胞增殖同时抑制肝癌细胞增殖功能。此外ASPR-FA-NP与ASPR-NP一样，具有良好的稳定性和生物安全性。

发明内容

本发明的目的是提供一种当归蛋白自组装形成蛋白质纳米颗粒ASPR –NP的技术，并将其应用于包埋难溶小分子（本文中以FA为例），形成ASPR-小分子-NP纳米颗粒，解决了难溶小分子水溶性差的问题，增加其生物利用度。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

所述当归蛋白，分子量为18.33KDa，N端序列为GIQKTEVEAPSTVSA 。

将0.5 mg/mL的 ASPR蛋白pH调至8.0，经过100 ℃加热15 min,室温冷却半小时，用100 KDa超滤管反复三次去除未反应的ASPR，即获得自组装的当归蛋白颗粒ASPR-NP。其平均粒径为154.9 ± 27.2 nm，PdI为0.26 ± 0.09，Zeta电势为-11.64 ± 2.66mv。ASPR-NP纳米颗粒低温下稳定性好，可跨膜进入细胞且具有良好的生物安全性。

将0.5 mg/mL的ASPR蛋白pH调至8.0，加入FA甲醇溶液，100 ℃水浴15 min，室温静置冷却，用100 KDa超滤管反复三次去除未反应的ASPR，即获得当归蛋白包埋FA纳米颗粒ASPR-FA-NP。其平均粒径为216.3 ± 18.3 nm，PdI为0.24 ± 0.08，Zeta电势为-14.65 ±5.01 mv。ASPR-FA-NP纳米颗粒也具有良好的生物安全性和稳定性，可选择性促进正常肝细胞增殖同时抑制肝癌细胞增殖。

本发明的优点在于：