[发明专利]蛋白核小球藻细胞利用木薯渣为主要原料制备油脂的方法

权利要求书

1.蛋白核小球藻细胞利用木薯渣为主要原料制备油脂的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

步骤1）制备里氏木霉种子液：将里氏木霉划线接种在PDA培养基上培养，得到单菌落；挑取单菌落接种到一级种子培养基进行培养，然后接入二级种子培养基培养，获得里氏木霉种子液；

步骤2）制备蛋白核小球藻液：挑取蛋白核小球藻，接种到含有生长培养基的容器中，光照强度6000lux，28℃培养，每天摇动容器2-3次，待生长至对数生长期，得到蛋白核小球藻液；

步骤3）制备黑曲霉种子液：将黑曲霉划线接种在斜面培养基上培养，得到单菌落；挑取单菌落接种到一级种子培养基进行培养，然后接入二级种子培养基培养，获得黑曲霉种子液；

步骤4）混合培养：将步骤2）所得处于对数生长期的蛋白核小球藻液和步骤1）所得里氏木霉种子液接种到含有木薯渣的培养基中，温度为28℃，24小时持续光照，强度为6000-8000Lux，转速为100rpm，发酵时间为2-3天，然后接入步骤3）所得黑曲霉种子液，继续培养3-4天，培养结束后，经过离心、洗涤和冷冻干燥后，即得到粉末；

步骤5）提取油脂：将粉末采用脉冲电场处理，然后将粉末添加到氯仿甲醇混合溶液中，添加量为1g粉末：2ml氯仿甲醇混合溶液，超声提取，然后离心，收集氯仿相，置于氮气中吹干，并且真空干燥，得到油脂；

所述脉冲电场处理为：电场强度20kV/cm，脉冲宽度4us，处理时间200us；

所述超声提取为：提取温度为60-65℃，超声功率为100-200W，提取时间为60-90min。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤1）中，一级种子培养基和二级种子培养基均为PDA液体培养基。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤2）中，生长培养基的组分为：葡萄糖10g/L，氯化铵 2g/L，硝酸钠 1g/L，磷酸二氢钾 0.5g/L，氯化钠 0.1g/L，七水硫酸镁0.1g/L，氯化钙30mg/L，柠檬酸铁铵20mg/L，七水硫酸锌10mg/L，硫酸锰10mg/L。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤3）中，所述斜面培养基组分为：马铃薯150g/L，蔗糖20g/L，琼脂15g/L；所述一级种子培养基和二级种子培养基的组分均为：玉米粉50g/L，蔗糖10g/L，硫酸铵5g/L，磷酸二氢钾1g/L，磷酸氢二钾1g/L。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤4）中，所述培养基的组成如下：木薯渣50-80g/L，硝酸钠 1-2g/L，磷酸二氢钾 0.5-1g/L，氯化钠 0.1-0.2g/L，七水硫酸镁0.1-0.2g/L，氯化钙50-70mg/L，柠檬酸铁铵20-30mg/L，七水硫酸锌10-15mg/L。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述氯仿甲醇混合溶液由氯仿与甲醇按照体积比为2:1制得。