[发明专利]寡糖的大规模酶合成的方法

权利要求书

1.一种以酶性方式合成唾液酸-Gb5寡糖的方法，其特征在于，包含：

(i)在CMP-Neu5Ac再生酶组存在下，自Neu5Ac生成CMP-Neu5Ac，其中该CMP-Neu5Ac再生酶组由胞苷单磷酸激酶、CMP-唾液酸合成酶、丙酮酸激酶及焦磷酸化酶所组成；

(ii)在UDP-Gal及β-1,3-半乳糖转移酶存在下，将Globo四糖-OR^1A(Gb4-OR^1A)转换为Globo五糖-OR^1A(Gb5-OR^1A)；及

(iii)在CMP-Neu5Ac及α-2,3-唾液酸转移酶存在下，将Gb5-OR^1A转换为唾液酸-Gb5-OR^1A，

其中(i)及(iii)是在唾液酸-Gb5-合成反应混合物中进行，该反应混合物由Neu5Ac、CTP、磷酸烯醇丙酮酸、Gb5-OR^1A、α-2,3-唾液酸转移酶、ATP、缓冲液、MgCl₂及CMP-Neu5Ac再生酶组组成，

其中R^1A为氢、经取代或未经取代的烷基、经取代或未经取代的烯基、经取代或未经取代的炔基、经取代或未经取代的环碳基、经取代或未经取代的杂环基、经取代或未经取代的芳基、经取代或未经取代的杂芳基或氧保护基团、生物素或神经酰胺，

其中该方法是以一锅法来实施，无纯化中间物的步骤，

其中该α-2,3-唾液酸转移酶是来自海洋细菌、该胞苷单磷酸激酶是来自大肠杆菌、该CMP-唾液酸合成酶是来自多杀性巴氏杆菌、该丙酮酸激酶是来自大肠杆菌、和该焦磷酸化酶是来自大肠杆菌。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，进一步包含分离唾液酸-Gb5-OR^1A。