[发明专利]一种蛋白质-多酚-多糖共价复合物的制备方法及其应用

权利要求书

1.一种蛋白质-多酚-多糖共价复合物的制备方法，其特征在于，所述制备方法为：首先通过碳二亚胺法活化多酚的羧基，使其与多糖反应生成多糖-多酚共价复合物；再利用漆酶诱导蛋白质与多糖-多酚共价复合物发生共价交联，形成蛋白质-多酚-多糖共价复合物，具体步骤为：

(1)将0.50g壳聚糖分散于70mL去离子水中，将壳聚糖溶液调节至pH 6.0，溶胀过夜，使其充分溶解；将1.20g阿魏酸、2.38g 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和1.43gN-羟基琥珀酰亚胺加入30mL无水乙醇中，4℃搅拌1h获得混合溶液；将壳聚糖溶液加入所述混合溶液中，4℃搅拌1h，随后，升温至25℃继续搅拌反应24h；将反应产物置于12kDa透析袋中，用去离子水透析24h；再将透析袋内混合溶液4500rpm离心1h，上清液置于12kDa透析袋中，用去离子水透析48h；然后冷冻干燥，得到阿魏酸含量为8.32wt％壳聚糖-阿魏酸共价复合物；

(2)将0.40gβ-乳球蛋白、0.40g壳聚糖-阿魏酸共价复合物分别溶解于20mL pH 5.0磷酸盐缓冲液中，溶胀过夜，其充分溶解；将β-乳球蛋白溶液和壳聚糖-阿魏酸共价复合物溶液均匀混合，向混合溶液中加入4U/mL的漆酶，25℃条件下反应2h，85℃加热1min进行灭酶,透析、冷冻干燥，获得β-乳球蛋白-阿魏酸-壳聚糖共价复合物。

2.权利要求1所述的蛋白质-多酚-多糖共价复合物在制备β-胡萝卜素乳状液中的应用，其特征在于，所述β-胡萝卜素乳状液的制备方法为：将蛋白质-多酚-多糖共价复合物溶解于pH 7.0的磷酸盐缓冲液中，形成质量分数为0.2％-1.2％的水相；β-胡萝卜素溶解于植物油中，形成质量分数为5％的油相；按照水相与油相质量比9:1混合，8000-12000rpm高速剪切5-10min，再进行高压均质，获得β-胡萝卜素含量为0.25％的乳状液。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述高压均质方式为：在温度为40℃-80℃条件下，采用两级均质阀加压，一级均质压力40-60MPa，二级均质压力4-6MPa，均质循环1-5次。