[发明专利]一种稳定共表达重组人源甜味受体蛋白的真核细胞系及其制备方法

权利要求书

1.一种稳定共表达重组人源甜味受体蛋白His-T1R2和FLAG-T1R3的真核细胞系，其特征在于：

(1)该真核细胞系稳定携带编码带有His标签的人源甜味受体蛋白T1R2(简称为His-T1R2)的核酸序列和编码带有FLAG标签的人源甜味受体蛋白T1R3(简称为FLAG-T1R3)的核酸序列；

(2)该真核细胞系由人胚胎肾细胞HEK293制备得到。

2.如权利要求1所述的真核细胞系的制备方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

(1)构建表达His-T1R2的重组质粒；构建表达FLAG-T1R3的重组质粒；

(2)将步骤(1)得到的两种重组质粒共同转染进入真核细胞中，并通过药物抗性筛选，得到具有抗生素抗性的阳性细胞克隆体，再通过蛋白质免疫印迹技术检测，优选出能够同时表达His-T1R2和FLAG-T1R3的细胞克隆体；

(3)将步骤(2)中得到的能够同时表达His-T1R2和FLAG-T1R3的细胞克隆体扩增培养，即得到稳定共表达His-T1R2和FLAG-T1R3的真核细胞系。

3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于：

步骤(1)中所述的两种重组质粒能够在真核细胞中分别表达His-T1R2和FLAG-T1R3；

步骤(2)中所述的转染方法为电穿孔转染法，所述真核细胞为人胚胎肾细胞HEK293，所述抗性筛选所用的药物为G418，所述G418为遗传霉素，是一种氨基糖苷类抗生素。

4.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述表达His-T1R2的重组质粒的制备方法包括以下步骤：

(1)将编码人源甜味受体蛋白T1R2的编码区核酸序列与编码His标签的核酸序列连接，得到表达His-T1R2的核酸序列；

(2)将步骤(1)得到的核酸序列插入到真核表达载体的多克隆酶切位点处，即得到所述表达His-T1R2的重组质粒。

5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中所述的真核表达载体为pcDNA3.1(+)。

6.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述表达FLAG-T1R3重组质粒的制备方法包括以下步骤：

(1)将编码人源甜味受体蛋白T1R3的编码区核酸序列与编码FLAG标签的核酸序列连接，得到表达FLAG-T1R3的核酸序列；

(2)将步骤(1)得到的核酸序列插入到真核表达载体的多克隆酶切位点处，即得到所述表达FLAG-T1R3的重组质粒。

7.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中所述的真核表达载体为pcDNA3.1(+)。

8.一种在真核细胞中同时表达His-T1R2、FLAG-T1R3和带有HA标签的重组人源嵌合体蛋白G15-gustducin44的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

(1)构建表达带有HA标签的重组人源嵌合体蛋白G15-gustducin44(简称为HA-G15-gustducin44)的重组质粒；

(2)将步骤(1)得到的重组质粒转染进入稳定共表达His-T1R2和FLAG-T1R3的真核细胞系中，在真核细胞中同时表达三种重组人源蛋白，即His-T1R2、FLAG-T1R3和HA-G15-gustducin44。

9.如权利要求8所述的制备方法，其特征在于：

步骤(1)中所述的重组质粒能够在真核细胞中表达HA-G15-gustducin44；

步骤(2)中所述的转染方法为电穿孔转染法，所述的真核细胞系为权利要求1所述的真核细胞系。

10.如权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述表达HA-G15-gustducin44重组质粒的制备方法的步骤为：

(1)将编码人源嵌合体蛋白G15-gustducin44的核酸序列与编码HA标签的核酸序列连接，得到表达HA-G15-gustducin44的核酸序列；

(2)将步骤(1)得到的核酸序列插入到真核表达载体的多克隆酶切位点处，即得到所述表达HA-G15-gustducin44的重组质粒；所述的真核表达载体为pLVX-Puro。