[发明专利]一种平阴玫瑰细胞液的体外美白功效评价方法

说明书

一种平阴玫瑰细胞液的体外美白功效评价方法，将平阴玫瑰细胞液溶于10%FBS/无酚红DMEM中，玫瑰细胞液浓度分组，用10%FBS/无酚红DMEM培养液培养小鼠源B16F10黑色素瘤细胞，置于离心管中，接种，待细胞贴壁，清洗，之后置于冰上，清洗后每孔加入Triton X‑100裂解，将裂解完的细胞收集至冰EP管中离心，离心结束取上清转移至冰好的EP管，BCA进行蛋白定量，定量结束50μg蛋白+PBS+10μl 10mM L‑DOPA=100μl置于每孔，将孔板置于烘箱475nm下读OD值。本发明可由分光光度法检测获得的酪氨酸酶活性测定方法来验证玫瑰细胞液的美白功效检测效果。

技术领域

本发明属于化工领域，涉及一种平阴玫瑰细胞液，具体来说是一种平阴玫瑰细胞液的美白功效评价方法。

背景技术

平阴县是国家命名的“中国玫瑰之乡”玫瑰栽培已有二千多年历史，平阴玫瑰以花大、色艳、香味浓郁、出油率高而蜚声中外。中国科学院大连物理研究所的化验数据证明平阴玫瑰所含的香叶醇、香叶酸等成分的含量数倍于保加利亚等国的玫瑰。且其他国家的玫瑰只能作化妆品，不能作食品，而平阴玫瑰不仅能作化妆品，而且能作食品、保健品。据《中药大辞典》等中国药典记载，玫瑰是药食同源的花卉。玫瑰在中药学被称为君子药，其性温和，香气甜润，具有排毒养颜、行气和血、开窍化瘀、疏肝醒脾、促进胆汁分泌、帮助消化、调节机理功效。玫瑰鲜花中有效成分最全面，但是玫瑰花在当地每年5月中旬是盛花期，整个花期不超过一个月，而玫瑰花不便于运输和储存，即使在摘花的当天早摘和晚摘的玫瑰花其香气也不相同。

人类的皮肤有不同的颜色，这主要是因为皮肤内黑色素的数量及分布情况不同所致。由于黑色素的数量、大小、类型及分布情况不同，从而决定了不同的肤色。人体皮肤的颜色主要决定于表皮内黑色素含量的多少。现在消费者对皮肤美白越来越重视，拥有健康、白皙，白净细嫩，白里透红，富有弹性的皮肤是所有人追求的目标，特别是在亚洲，美白产品是一年四季旺销护肤品类。

化妆品中的美白功能性成分(美白剂)的美白机理是：美白剂通过作用于皮肤黑色素形成或代谢途径的某个阶段，控制或抑制黑色素生成，从而实现对皮肤的美白功效。目前多数化妆品中添加的美白剂是通过抑制酪氨酸酶活性或阻断从酪氨酸生成黑色素的氧化反应，从而减少黑色素的生成而达到美白皮肤的效果。因此，该类美白剂对酪氨酸酶活性抑制率的高低成为衡量其美白功效的重要指标，抑制率越高则其美白功效越好。目前常用的美白剂功效检测方法有细胞水平功效测定法(陆晔，周名权，吕小枫等.)特殊用途化妆品的功效评价.环境与健康.2001,18(2):121–124)、动物实验法(黄畋，仲王旬. 某些化妆品致色素作用的实验研究.中华皮肤科.1996,(6):430–431)和人体实验法(Kawada A,KameyamaH,Asai M,et al.A new approach to the evaluation of whitening effect of acosmetic using computer analysis of video-captured image.J Dermatol Sci.,2002,29(1):10-18)，但大多存在操作复杂、实验技术要求高、检测周期长、精度较差等问题。目前市售常用的美白剂有熊果苷、曲酸、维生素C及其衍生物等物质。

黑色素生成途径中有3个关键的限速酶：酪氨酸酶(TYR)、酪氨酸相关蛋白酶1(TYRP1)和酪氨酸相关蛋白酶2(TYRP2)。酪氨酸酶(TYR)可催化酪氨酸羟化生成多巴，之后又催化多巴氧化生成多巴醌，从而启动黑色素合成过程，所以酪氨酸酶在黑色素生成途径中具有酪氨酸羟化酶(TH)和多巴氧化酶的双重活性。多巴醌经多聚化反应与氧化反应生成多巴色素，多巴色素进一步羟化生成5,6－二羟基吲哚羧酸(DHICA)，脱羧生成5,6－二羟基吲哚 (DHI)，在酪氨酸酶氧化作用下生成5,6－吲哚醌，最后与其他中间产物结合形成真黑色素。

针对上述美白原料的特点和市场需要，要求产品具有较好美白效果，且有较低的过敏，刺激性，将受清费者青睐。

发明内容