[发明专利]一种用于培养肺癌实体瘤原代细胞的培养基

说明书

本发明公开了一种用于培养肺癌实体瘤原代细胞的培养基。本发明提供了一种肺癌实体瘤原代细胞培养方法及配套试剂，本发明配制特殊的无血清培养基，利用悬浮培养体系对肺癌实体瘤来源的肿瘤细胞进行体外培养，保证癌细胞正常扩增的同时最大限度的排除正常细胞的干扰。利用本发明方法得到的肺癌原代细胞培养物可以用于多种细胞水平的体外实验、二代测序、构建动物模型、构建细胞系等等。可以预见，这种培养方法及本发明所提供的特殊培养基在肺癌的研究和临床诊断治疗领域具有广泛的应用前景。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种用于培养肺癌实体瘤原代细胞的培养基。

背景技术

肺癌是世界上发病率和死亡率最高的癌症，其中男性肺癌发病率和死亡率在所有恶性肿瘤中最高，而女性肺癌发病率和死亡率均为第二位。同时，肺癌发病增长率和死亡增长率在所有恶性肿瘤中最高。可以说肺癌是对人类健康和生命威胁最大的恶性肿瘤之一。

尽管世界各国的科研和医疗机构对肺癌的病因以及发生发展过程的研究都有很大力度的投入，但是人类对这种疾病仍然知之甚少。肺癌是一种复杂疾病，其发生、发展是一个动态的过程，涉及到诸多信号分子相互作用，形成了一个复杂的分子调控网络，同时还受到外界环境因素的影响。肺癌的病因和发生发展过程有很强的个体差异性，不能一概而论。因此将肺癌实体瘤原代细胞培养物作为模型进行个体化精准研究是肺癌研究领域乃至肺癌诊断治疗领域的趋势。

现有的原代肿瘤细胞培养技术主要有2D培养，3D培养，重编程培养等几类，这些方法都不同程度的面临培养周期极长，培养成功率低，杂细胞难以去除等问题。

发明内容

为了有效解决上述技术问题，本发明提供了一种新的肺癌实体瘤原代细胞培养技术及配套试剂，本发明配制特殊的无血清培养基，利用悬浮培养体系对肺癌实体瘤来源的肿瘤细胞进行体外培养，保证癌细胞正常扩增的同时最大限度的排除正常细胞的干扰。

第一方面，本发明要求保护一种用于培养肺癌实体瘤原代细胞的培养基。

本发明所提供的用于培养肺癌实体瘤原代细胞的培养基由双抗P/S(青霉素-链霉素)、HEPES、非必需氨基酸溶液、人重组蛋白EGF、人重组蛋白bFGF、人重组蛋白MSP、人重组蛋白HGF、N-2、B27、ITS-X(Insulin,Transferrin,Selenium,Ethanolamine Solution)、N-乙酰半胱氨酸和Advanced DMEM/F12培养基组成。

其中，所述双抗P/S中的青霉素的终浓度为100-200U/mL(如100U/mL)；所述双抗P/S中的链霉素的终浓度为100-200μg/mL(如100μg/mL)；所述HEPES的终浓度为8-12mM(如10mM)；所述非必需氨基酸溶液的终浓度为0.8-1.2％(如1％，％表示体积百分含量)；所述人重组蛋白EGF的终浓度为10-100ng/mL；所述人重组蛋白bFGF的终浓度为10-50ng/mL；所述人重组蛋白MSP在所述肺癌实体瘤原代细胞培养基中的终浓度为5-25ng/mL；所述人重组蛋白HGF的终浓度为10-100ng/mL；所述N-2的终浓度为0.8-1.2％(如1％，％表示体积百分含量)；所述B27的终浓度为1.5-2.5％(如2％，％表示体积百分含量)；所述ITS-X的终浓度为0.8-1.2％(如1％，％表示体积百分含量)；所述N-乙酰半胱氨酸的终浓度为1-5mM；余量均为Advanced DMEM/F12培养基。以上各物质的终浓度均为在所述用于培养肺癌实体瘤原代细胞的培养基中的终浓度。