[发明专利]中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白核酸适配子A42及其筛选方法和应用

说明书

本发明涉及一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白核酸适配子A42及其筛选方法和应用，所述适配子A42的序列为：5’‑AGCAGCACAGAGGTCAGATGCCGTGCGGATGTACAGGGACTTGGATAGTTTCTGA CCTATGCGTGCTACCGTGAA‑3’；该核酸适配子A42能高亲和力、高特异性地与NGAL结合，其中Kd值为66.55nM，其在AKI诊断方面具有应用前景，可运用于分离、纯化中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白中、制备中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的检测试剂中以及研制治疗中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白相关疾病药物中。

技术领域

本发明涉及一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白核酸适配子A42及其筛选方法和应用。

背景技术

急性肾损伤(Acute Kidney Injury，AKI)是一种肾小球滤过率急剧下降所导致的临床常见疾病，临床表现包括血清尿素氮和血清肌酐水平突然并持续升高，同时伴有盐水失衡。AKI是各种严峻条件下的一种最为常见的综合症，住院患者中的发病率为5％-7％，而危重患者中高达30％，并且患有AKI的危重患者的死亡率高达50％。此外，AKI与不良转归密切相关，包括死亡率增加、住院时间延长、危重患者的机械通气持续时间延长，及发展为慢性肾脏疾病风险增加等。

中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(Neutrophil gelatinase associatedlipocalin，NGAL)，又名脂质运载蛋白2、噬铁蛋白或癌基因24p3，分子量25kD，在体内以多种形式存在，单体、46kD的同源二聚体、与金属蛋白酶9(Matrix Metalloproteinase 9，MMP-9)结合形成的135kD的异源二聚体。NGAL在各种损伤后合成增加，尤其是肾脏疾病，被认为是最有前景的肾脏内科临床标志物。研究表明NGAL与AKI密切相关，在AKI患者的血清和尿液中NGAL水平显著升高，并且升高程度与肾脏损伤严重程度相关，因此NGAL是早期诊断AKI 的强有力的指标，在各类疾病诱发的AKI的早期诊断、预测及治疗后肾功能恢复情况的监测中有着明显的优势和临床价值，具有巨大的应用前景，运用好 NGAL检测，将大大降低AKI发病率和死亡率。

核酸适配子是一类具有特殊的三维立体结构(发卡，假结，凸环，G-四聚体等)，可以高特异性高亲和性结合靶标的单链DNA(Single stranded DNA， ssDNA)或RNA。核酸适配子通过指数富集的配体系统进化技术(Systematic Evolution of Ligands byExponential Enrichment，SELEX)筛选获得，核酸适配子具有稳定性好、生产周期短、费用低、可化学合成大量生产、进行各种功能化修饰等优点，因此，核酸适配子在检测诊断方面具有广阔的前景。

发明内容

本发明的目的在于提供一种高亲和力、高特异性的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白核酸适配子A42及其筛选方法和应用。

本发明的目的通过如下技术方案实现：一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白核酸适配子A42，它的序列如下所示：

AGCAGCACAGAGGTCAGATGCCGTGCGGATGTACAGGGAC 40

TTGGATAGTTTCTGACCTATGCGTGCTACCGTGAA 75；

在25℃，0.1M Na⁺，0.001M Mg²⁺条件下其二级结构为茎环结构，其分子结构如下：

所述的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白核酸适配子A42的筛选方法，基于核酸适配子的体外SELEX筛选技术，利用羧基磁珠作为固相介质，以NGAL为靶标，通过NGAL羧基磁珠从ssDNA库中筛选得到与NGAL特异性结合的核酸适配子。