[发明专利]一种二价靶向多肽探针及其制备方法

权利要求书

1.一种二价靶向多肽探针，其结构包括四个组成部分：

A)两个肿瘤特异性靶向多肽；B)两个PEG连接臂；C)骨架核心肽；D)荧光分子；

其中，每个所述肿瘤特异性靶向多肽与PEG连接臂通过式I所示的基团相连；

所述骨架核心肽其氨基酸序列如下所示：KGGKG；

所述骨架核心肽与所述肿瘤特异性靶向多肽是通过PEG连接臂偶联的；

所述荧光分子与所述骨架核心肽通过化学键相连；

所述肿瘤特异性靶向多肽适用于将所述偶联物靶向至肿瘤细胞，并以所述肿瘤细胞表面携带的标志蛋白LAPTM4B作为特异性靶标；

所述PEG连接臂为PEG₉；

所述荧光分子选自荧光素、罗丹明、尼罗红、萘酰亚胺、菁染料中的至少一种；

所述肿瘤特异性靶向多肽为AP2H多肽，其氨基酸序列如下所示：IHGHHIISVG。

2.根据权利要求1所述的二价靶向多肽探针，其特征在于：所述荧光分子选自荧光素荧光素。

3.根据权利要求1或2所述的二价靶向多肽探针，其特征在于：所述肿瘤特异性靶向多肽为AP2H，所述二价靶向多肽探针具有下式所示的结构：

4.制备权利要求1-3中任一项所述二价靶向多肽探针的方法，包括下述步骤：

1)采用固相多肽合成法制备骨架核心肽：用FMOC固相多肽合成法在Fmoc-Gly-Wang树脂上由C端开始合成多肽KGGKG，将氨基酸逐个偶联到树脂上，随后在N末端赖氨酸的α氨基与ε氨基上偶联Fmoc-PEG₉-CH₂-CH₂-COOH分子，然后再连接叠氮乙酸，在C末端赖氨酸的ε氨基上偶联FITC，将产物从树脂上裂解下来，得到叠氮修饰的骨架核心肽；

2)采用固相多肽合成法制备肿瘤特异性靶向多肽；然后在固相多肽合成树脂上，通过5-己炔酸原位衍生法在所述肿瘤特异性靶向多肽的氨基端修饰炔基，将产物从树脂上裂解下来，得到炔基修饰的肿瘤特异性靶向多肽；

3)通过液相click反应将步骤1)制备的骨架核心肽与步骤2)制备的肿瘤特异性靶向多肽相连，得到二价靶向多肽探针。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：

所述步骤1)中，制备骨架核心肽的具体方法如下：

a1)以Fmoc-Gly-Wang树脂为起始原料，体积分数20％六氢吡啶/DMF为脱保护试剂，脱去Fmoc保护基；然后加入4倍摩尔量氨基酸Fmoc-Lys(Dde)-OH、HOBt、HBTU，以及活化试剂N-甲基吗啡啉/DMF，进行偶联反应；通过乙酸酐对未反应完全的甘氨酸树脂进行封端；脱去已偶联上的Fmoc-Lys(Dde)-OH中的Fmoc保护基，然后称取4倍摩尔量的Fmoc氨基酸、HOBt和HBTU，依次偶联Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Gly-OH和Fmoc-Lys(Fmoc)-OH；

b1)按照每个氨基2倍摩尔量称取Fmoc-PEG₉-CH₂CH₂-COOH、HOBt和HBTU，偶联后脱去Fmoc保护，按照每个氨基4倍摩尔量称取叠氮乙酸、HOBt和HBTU进行固相偶联；随后脱去赖氨酸的Dde保护基；按照每个氨基称取2倍摩尔量的荧光分子、4倍摩尔量的N，N’-二异丙基乙胺，进行偶联反应；

c1)利用裂解液将骨架核心肽从树脂上裂解下来，即得；其中所述裂解液由体积分数为95％三氟乙酸，2.5％水，2.5％三异丙基硅烷组成。