[发明专利]一种硅胶固定GDH催化制备NADPH的方法有效
| 申请号： | 201810430317.7 | 申请日： | 2018-05-08 |
| 公开（公告）号： | CN108642035B | 公开（公告）日： | 2022-03-25 |
| 发明（设计）人： | 梁国斌;许光斗;宋帅;林伟 | 申请（专利权）人： | 江苏理工学院 |
| 主分类号： | C12N11/14 | 分类号： | C12N11/14;C12P19/36 |
| 代理公司： | 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 | 代理人： | 张勇 |
| 地址： | 213000 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 硅胶 固定 gdh 催化 制备 nadph 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种反应柱固定化酶催化制备NADPH的方法，包括如下步骤：
1)用磷酸氢二钾和磷酸二氢钾分别配置0.1mol/L和0.2mol/L pH 6.8－7.2的磷酸缓冲溶液，备用；
2)配置1.25mol/L的氢氧化钠溶液，备用；
3)将130g硅胶加入到300mL、0.2mol/L的磷酸缓冲溶液中浸泡12h；浸泡后，清洗硅胶：去除上清液，将130g浸泡后的硅胶加入300mL、0.2mol/L的新鲜磷酸缓冲溶液，震荡3min，静置2min，更换缓冲液，清洗硅胶的步骤重复4次；
4)将处理好的硅胶置于73g GDH溶液中，即将14.6g GDH用0.1mol/L磷酸缓冲溶液稀释5倍，GDH的比活力为600u/mg，并在25℃下吸附固定55min，得到固定化GDH；
5)将步骤4中固定的GDH加入反应柱，反应柱为玻璃材质的圆柱体，规格为：高18.5cm，内径3cm，然后用高压泵对反应柱进行加压处理，压力为0.02MPa，确保填充均匀紧实；
6)取200g葡萄糖和10g氧化型NADP+，用0.1mol/L磷酸缓冲溶液定容至1000mL，备用；
7)取580mL上述混合溶液，于37℃，以29mL/min的流速通过反应柱，并在进样口滴加氢氧化钠溶液，维持pH＝7.0。
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