[发明专利]一种青天葵球茎组织培养快速繁殖方法

说明书

本发明公开了一种青天葵球茎组织培养快速繁殖方法，其特征在于包括以下步骤：(1)外植体的取材与消毒；(2)无菌根状茎的获取；(3)根状茎繁殖及球茎诱导一体化培养；(4)球茎炼苗移栽。与现有技术相比，本发明技术方案的有益效果是：本发明通过生物技术对青天葵球茎进行组织培养快速繁殖，在短时间内培育出大量可供大田栽培的青天葵种苗，显著提高了青天葵种苗的繁殖系数和种苗质量，实现规模化生产，满足生产上的需要。

技术领域

本发明涉及一种青天葵球茎组织培养快速繁殖方法。

背景技术

青天葵为兰科植物毛唇芋兰Nerviliafordii(Hance)Schitr的叶或带球茎的叶，又名独叶莲、独脚莲、珍珠叶、坠千斤、铁帽子、山米子、青莲。性平，味苦，甘、凉。青天葵是我国珍稀濒危植物，有清肺止咳，健脾消积，清热解毒，消结散疬等功效，主治肺痨咯血，肺热咳嗽，小儿肺炎，急性喉炎，口腔炎，咽喉肿痛，瘰疬，疮疡肿毒，跌打损伤等。青天葵主要以球茎进行繁殖，但繁殖系数极低，加之多年来人们灭绝式的挖掘，导致野生青天葵资源日益枯竭。然而，国内外市场的需求量却逐年加大，青天葵已远远满足不了市场的需求。

通过栽培试验比较，发现青天葵组培球茎不仅能正常生长，而且在相同条件下栽培组培球茎优于野生球茎。因此，如何利用现代生物技术通过优化青天葵组织培养条件，为青天葵组织培养规模化生产育苗提供技术支撑，从而更好的开发和利用青天葵药用植物资源。

发明内容

本发明旨在提供一种青天葵球茎组织培养快速繁殖方法。

本发明为实现上述目的，采取以下技术方案予以实现：

一种青天葵球茎组织培养快速繁殖方法，包括以下步骤：

(1)外植体的取材与消毒：青天葵球茎作为外植体进行消毒，首先将3-5滴洗洁精滴入装有50ml自来水的烧杯中，把外植体放入烧杯轻轻搅拌5min，再用棉花清洗外植体表面污垢，自来水轻微流水冲洗20-30min；移置超净工作台，用75v/v％乙醇浸泡30s，无菌水冲洗一遍，然后再用添加了1-2滴吐温-20的50ml浓度为0.1v/v％升汞消毒1-2min、无菌水冲洗3-5次，获得无菌外植体，其中无菌水为经高高温压灭菌的蒸馏水；

(2)无菌根状茎的获取：将消毒好的外植体置于诱导培养基中进行不定芽诱导，发芽得到无菌根状茎，所述诱导培养基是以1/2MS为基本培养基，添加5g·L^-1琼脂，20g·L-1蔗糖，1.5mg·L-1的6-苄基腺嘌呤，0.3mg·L-1的萘乙酸，培养基pH值为6.8，培养条件为：温度为25-27℃，光照强度1500-2000lux，光照时间为10-12h/d，培养时间为15-20d；

(3)根状茎繁殖及球茎诱导一体化培养：切取2-3cm的无菌根状茎置于添加5g·L-1琼脂，25g·L-1蔗糖，1.0-2.0mg·L-1的6-苄基腺嘌呤、0.1-0.5mg·L-1的激动素(KT)、0.1-0.5mg·L-1的萘乙酸、菠萝汁100-200g·L-1的1/2MS培养基中培养获得球茎，培养基pH值为6.8，培养条件为：温度为25-27℃，光照强度1500-2000lux，光照时间为13-14/d，培养时间为20d；

(4)球茎炼苗移栽：球茎进行炼苗后移植于基质中培养，先移栽至大棚7天，再移栽至大田。

优选的，步骤(4)中的炼苗移栽按以下操作进行：经过步骤(3)获得球茎，在室温为20℃的室内进行炼苗，并在瓶中加水淹没培养基，炼苗5-7d，取出球茎，洗净培养基，再放入ABT生根粉配成100mg/·L-1的溶液中浸泡30min,浸泡后移栽到基质中生长30-40d，再移栽至大田。

优选的，所述基质为按优质塘泥：黄沙＝2：1的比例混合。

与现有技术相比，本发明技术方案的有益效果是：