[发明专利]一种生物技术产品DNA含量估计方法

说明书

本发明公开了一种生物技术产品DNA含量估计方法，可得到DNA的相对百分含量。所述估计方法从实时荧光定量PCR或数字PCR的样品中获得DNA的百分含量需要两次测试。一次用来检测外源插入基因的DNA拷贝数，称之为X，另一测用来检测内源基因DNA拷贝数，称之为Y。两次测试必须是独立进行的，通过本发明所述估计方法能得到DNA的相对百分含量。本发明的估计方法具有广泛适用性，能够准确计算并客观反应生物技术产品的DNA含量，该计算方法对于生物技术产品的基因含量提供了一种准确的数学模型，对我国生物技术产品定量分析及相关产品监管、检测具有十分重要指导意义。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种生物技术产品DNA含量估计方法。

背景技术

随着生物技术产品，如转基因作物及相关产品，在全世界范围内的迅速发展，其环境安全和食用安全问题一直受到各国政府和广大消费者及相关机构人员的重视。对生物技术产品核酸进行定量检测，保证检测结果的准确、可靠和有效性至关重要。

由于生物技术产品的含量分析是通过外源基因(转入基因)拷贝数比上内源基因拷贝数获得的，并且外源基因拷贝数和内源基因拷贝数是分别(独立)测量的。每次会获得一系列的外源基因拷贝数结果与内源基因拷贝数结果，计算比值时存在人为的主观选择过程，常常使得计算结果的标准偏差SD和相对标准偏差CV因人而异。

因此，建立一种摆脱人为干扰的新型生物技术产品含量计算方法，对于生物技术产品核酸含量检测提供了一种更准确的计算手段，对我国核酸检测方法标准化及标准物质研制具有十分重要的意义。

发明内容

本发明的目的之一是提供一种生物技术产品核酸含量的计算方法。

一种生物技术产品DNA含量估计方法，其特征在于，从应用实时荧光定量PCR或数字PCR的样品中获得DNA的百分含量需要两次测试。一个用来检测目的基因的DNA的拷贝数，称之为X，另一个用来检测内源DNA拷贝数，称之为Y。两个实验必须是独立进行的(例如，在不同的孔中进行反应)。

一种生物技术产品DNA含量估计方法，其特征在于，按照如下步骤进行：

(1)实时荧光定量PCR或数字PCR的样品中DNA样品相对百分含量通以下公式得到：

(2)X和Y为随机变量，根据以下展开公式计算两变量比值的平均值及误差。

(4)μ_x和μ_Y分别用目的DNA拷贝数和内源DNA拷贝数重复平均数的估算值来评价，Var[X]和Var[Y]也用重复数据的误差来评价。假定X和Y间的互作误差忽略不计(互作误差没有包括在2及3的公式中)。单次检测的相对误差通过下面公式计算：

(4)多次重复实验，这里用n表示重复的次数(如n＝2，表示2次重复检测)。则n次重复均值的近似均数和误差为：

N个重复样品的相对标准偏差(CV)则可以用(5)和(6)来计算：

本发明的有益效果：本发明的估计方法具有广泛适用性，能够准确计算并客观反应生物技术产品的DNA含量，该计算方法对于生物技术产品的基因含量提供了一种准确的数学模型，对我国生物技术产品定量分析及相关产品监管、检测具有十分重要指导意义。

具体实施方式

下面对本发明的具体实施方式进行详细描述，但应当理解本发明的保护范围并不受具体实施方式的限制。