[发明专利]一种鸽I型副粘病毒的RT-PCR检测试剂盒及其检测方法

说明书

本发明公开了一种鸽I型副粘病毒的RT‑PCR检测试剂盒及其检测方法，所述的引物组包括引物S1、S2，其中：S1:5’‑AAGGCTTAGGCTAGCTTACCAT‑3’,S2：5’‑CAAGGTAGCTGAGTCGACCTGTATG‑3’，S3：5’‑ATAAGGGCTGAGTCGACTGAT‑3’。本发明设计特异性引物S1、S2和S3，能够对鸽I型副粘病毒进行特异性扩增。本发明的专用试剂盒具有很强的敏感性，且与病毒分离和IFA等方法相比符合率可达100％，能够广泛用于鸽I型副粘病毒的鉴别诊断。

技术领域

本发明涉及兽医生物病毒检测技术领域，具体涉及一种鸽I型副粘病毒的RT-PCR检测试剂盒及其检测方法。

背景技术

鸽I型副粘病毒病是由鸽副黏病毒引起的一种高度接触性、败血性传染病，俗称“鸽瘟”，具有与新城疫病原类似的特性。各种品种、年龄、性别的鸽都易感，发病没有明显的季节性，一年四季都有发生。鸽被I型副黏病毒感染后，潜伏期1-10天，通常1-5天。病鸽表现扭头、曲颈、转圈，有的不能站立,有的翅下垂，有的蹲伏或侧卧。食欲下降，嗉囊空虚，充满液体或气体，倒提口流黏液。拉黄绿色稀便，鸽的羽毛、趾爪常被粪便污染为黄绿色。目前此病无有效的药品。

由于该病的死亡率一般可达20％-80％，对养鸽业危害极大，故建立一种鸽I型副粘病毒的反转录PCR诊断方法和专用试剂盒，能够方便在疫病发生早期快速、准确的诊断疫病，为疫病的防控提供有效的参考。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种鸽I型副粘病毒的RT-PCR检测试剂盒及其检测方法，该试剂盒能够快速区分鸽I型副粘病毒。

为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：

一种鸽I型副粘病毒的RT-PCR检测试剂盒，所述的引物组包括引物S1、S2、S3，其中：

S1：5’-AAGGCTTAGGCTAGCTTACCAT-3’；

S2：5’-CAAGGTAGCTGAGTCGACCTGTATG-3’；

S3：5’-ATAAGGGCTGAGTCGACTGAT-3’。

一种所述的引物组在制备用于鸽I型副粘病毒鉴别诊断试剂盒中的应用。

一种所述的引物组的鸽I型副粘病毒鉴别诊断试剂盒。

所述的试剂盒还包括核酸提取试剂、反转录试剂、PCR扩增试剂、和/或琼脂糖凝胶电泳试剂。

所述的反转录试剂包括10×M-MLV缓冲液、dNTP、M-MLV反转录酶、RNase酶抑制剂、S2引物。

所述的PCR扩增试剂包括10×PCR扩增缓冲液、dNTP、S1引物、S2引物、Taq DNA聚合酶和双蒸水。

所述的PCR扩增试剂所构建的PCR扩增体系为：10×PCR扩增缓冲液5.0μL、2.5mmol/L dNTP8.0μL、10mmol/L S1引物1.0μL、10mmol/L S2引物1.0μL、5U/μL Taq DNA聚合酶1.0μL、模板3.0μL，补加双蒸水至50μL。

一种所述的试剂盒的使用方法，包括核酸提取、反转录、PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳。

所述的PCR扩增条件为：95℃预变性5min；94℃变性30s，57℃退火30s，72℃延伸90s，共35个循环；最后72℃延伸10min。

本发明的有益效果：