[发明专利]一种海氏肠球菌玻片凝集血清抗体检测试剂盒、制备方法及其应用

权利要求书

1.一种海氏肠球菌玻片凝集血清抗体检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括：(1)海氏肠球菌玻片凝集试验抗原；(2)标准阳性血清；(3)标准阴性血清。

2.一种制备权利要求1中的海氏肠球菌玻片凝集血清抗体检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤A、海氏肠球菌玻片凝集试验抗原的制备：将海氏肠球菌进行增菌培养后，进行甲醛灭活，再离心取沉淀，用5g/L(w/v)石炭酸生理盐水悬浮得到；

步骤B、标准阳性血清的制备：取海氏肠球菌进行增菌培养后，离心取沉淀，进行水浴灭活，与弗氏完全佐剂混匀，免疫未感染过海氏肠球菌的健康鸭，从鸭翅静脉采血分离血清，用琼脂扩散试验检测抗体效价，效价达1:32以上即为标准阳性血清；

步骤C、标准阴性血清的制备：取健康鸭的颈动脉血，收集至大离心管中，室温过夜，离心，取上清，经琼脂扩散试验检测，海氏肠球菌血清抗体为阴性，即得到标准阴性血清；

步骤D、将上述制备的海氏肠球菌玻片凝集试验抗原、标准阳性血清、标准阴性血清组装成海氏肠球菌玻片凝集血清抗体检测试剂盒。

3.如权利要求2所述的制备权利要求1中的海氏肠球菌玻片凝集血清抗体检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述步骤A中制备海氏肠球菌玻片凝集试验抗原的海氏肠球菌菌株保存于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC No:M 2018115。

4.如权利要求2所述的制备权利要求1中的海氏肠球菌玻片凝集血清抗体检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述步骤A中制备海氏肠球菌玻片凝集试验抗原的灭活甲醛浓度为3‰～4‰，在37℃灭活24h～30h，每间隔2h摇晃菌瓶。

5.如权利要求1所述的一种海氏肠球菌玻片凝集血清抗体检测试剂盒在检测海氏肠球菌血清抗体中的应用。

6.一种海氏肠球菌玻片凝集试验抗原检测血清抗体的方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤一、取出4℃保存的海氏肠球菌玻片凝集试验抗原，恢复至室温，充分摇匀；

第二步，在玻璃板上分别滴加待检血清、标准阳性血清、标准阴性血清各25ul；

第三步，分别加入充分摇匀的海氏肠球菌玻片凝集试验抗原25μl，充分混匀；

第四步，室温静置2～5分钟，观察海氏肠球菌玻片凝集试验抗原与对应血清的凝集现象；

第五步，根据其是否凝集来判定阳性、阴性结果。