[发明专利]对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒的荧光定量PCR检测引物组及检测试剂盒

说明书

本发明涉及一种对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒的荧光定量PCR检测引物组。所述荧光定量PCR检测引物组，包括正向引物和反向引物，所述正向引物序列为：5'‑GGGAGTTACCTTTGCTGC‑3'；所述反向引物序列为：5'‑GGTCCGTCTACTGCGTCT‑3'。本发明还涉及一种对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒的荧光定量PCR检测试剂盒。有益效果：灵敏度高：可以检测到1拷贝的传染性皮下及造血组织坏死病毒。特异性好：与其它6种常见对虾病原及对虾组织不发生交叉反应。操作简单、快速：将传染性皮下及造血组织坏死病毒正反引物加入荧光定量PCR反应液中，简化了操作步骤。

技术领域

本发明涉及一种对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒的荧光定量PCR检测引物组，还涉及一种对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒的荧光定量PCR 检测试剂盒，属于海洋生物病原检测技术领域。

背景技术

传染性皮下及造血组织坏死病毒(Infectious hypodermal and haematopoieticnecrosis virus,IHHNV)是已知对虾病毒中最小的病毒，病毒粒子大小为22nm,是无囊膜二十面体，线性单链DNA，长度约3.9kb，包含3个开放阅读框(open reading frame，ORF)。IHHNV于1981年在美国夏威夷地区的细角滨对虾(Litopenaeus stylirostris)中首次报道，已在世界范围内广泛流行。IHHNV感染凡纳滨对虾和斑节对虾后不会造成对虾大量死亡，但可致幼虾生长缓慢、畸形，规格参差不齐，称为慢性矮小残缺综合症(Runt-deformitysyndrome,RDS)，每年给对虾养殖业造成巨大经济损失，已被世界动物卫生组织(The WorldOrganisation for Animal Health, OIE)列为须向其申报的甲壳类重要病原。

目前荧光定量PCR检测技术是进行对虾病毒定量及早期预防的主要手段，基于SYBR Green建立的荧光定量PCR方法能迅速定量检测IHHNV，且价格低廉，操作简便，适合大规模推广。García等2015年建立了基于SYBR Green 的IHHNV荧光定量PCR检测方法，最低可检测到81拷贝的IHHNV DNA，此检测方法灵敏度有待进一步提高。因荧光定量PCR检测方法是进行对虾病毒定量及早期预防的重要有效手段，所以建立高灵敏度的SYBR Green实时荧光定量PCR检测方法，以及配合该检测方法使用的病毒检测试剂盒极为重要。因此，有必要提出有效的技术方案，解决上述问题。

发明内容

本发明针对上述现有技术中存在的灵敏度不高的问题，提供一种对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒的荧光定量PCR检测引物组及检测试剂盒。该检测试剂盒灵敏度高、特异性好、操作简单快速。

本发明解决上述技术问题的技术方案如下：

一种对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒的荧光定量PCR检测引物组，所述荧光定量PCR检测引物组，包括正向引物和反向引物，所述正向引物序列为：5'-GGGAGTTACCTTTGCTGC-3'；所述反向引物序列为： 5'-GGTCCGTCTACTGCGTCT-3'。

一种对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒的荧光定量PCR检测试剂盒，所述试剂盒包括：

(1)SYBR Green实时荧光定量PCR反应液管，内装2×荧光定量PCR buffer及如权利要求1所述的荧光定量PCR检测引物混合物；

(2)阴性对照管，内装SPF对虾核酸；

(3)标准品管，分别内装传染性皮下及造血组织坏死病毒10⁸,10⁷,10⁶, 10⁵,10⁴,10³,10²,10,1拷贝DNA阳性克隆。

有益效果：