[发明专利]一种核酸释放剂及乙肝病毒核酸释放方法

说明书

本发明公开了一种核酸释放剂及乙肝病毒核酸释放方法，该核酸释放剂包括：质量体积百分比为0.02‑0.2％的Gemini季铵盐表面活性剂、50‑300mM的氢氧化钾和0.2‑2ml/100ml的异丙醇，余量为无菌水。本发明的微量核酸释放剂，能快速破坏病原体外壳蛋白结构，并使血清蛋白等干扰PCR扩增的物质封闭、沉淀且使乙肝病毒DNA发生络合作用而充分析出。本发明具有使用安全，操作简便，制造成本低廉的优点。本发明用于直接对血清、血浆或全血标本中乙肝病毒DNA的释放，无需加热，无需离心，只需一步加样，即可完成DNA的释放和提取。本发明实现了乙肝病毒核酸提取与扩增‑荧光PCR定量检测的一步法操作，从根本上解决了多步核酸提取法带来的核酸丢失和污染问题。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种核酸释放剂及乙肝病毒核酸释放方法。

背景技术

目前，核酸提取方法主要有四种：(1)传统煮沸法：碱性裂解液直接与含病原液体混合，高温裂解，离心获取核酸。(2)浓缩煮沸法：先用多聚糖浓缩沉淀病原，然后加碱性裂解液高温裂解，离心获取核酸。(3)离心柱法：采用硅胶膜或玻璃纤维膜吸附、纯化、洗脱获取核酸。(4)磁珠法：采用硅粉或聚乙二烯包被的磁珠吸附、纯化、洗脱获取核酸。

第(1)(2)种方法提取时需要多次换管离心等步聚，样本处理时间长，得率偏低；离心柱法好于第(1)(2)种方法，但步聚仍繁多，提取效率低；磁珠法提取步聚简单，回收率高，易于自动化提取，但产品价格十分昂贵，目前应用并不广泛。

发明内容

本发明的目的是提供一种核酸释放剂及乙肝病毒核酸释放方法，以解决上述现有技术的问题。

为达到上述目的，本发明提供了一种核酸释放剂，所述核酸释放剂包括：质量体积百分比为0.02-0.2％的Gemini季铵盐表面活性剂、50-300mM的氢氧化钾和0.2-2ml/100ml的异丙醇，余量为无菌水。

本发明还提供了一种乙肝病毒核酸释放方法，其包括以下步骤：将上述的核酸释放剂与含乙肝病毒的待测样本混合均匀后，室温下静置一段时间，即得到目的核酸。

上述的乙肝病毒核酸释放方法，其中，所述核酸释放剂与待测样本的体积比为1：1-3。

上述的乙肝病毒核酸释放方法，其中，所述待测样本为血清、血浆或全血。

上述的乙肝病毒核酸释放方法，其中，所述混合均匀的方法为用移液枪插入混合溶液底部吸打多次。

相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：

本发明的微量核酸释放剂，能快速破坏病原体外壳蛋白结构，并使血清蛋白等干扰PCR扩增的物质封闭、沉淀且使乙肝病毒(HBV)DNA发生络合作用而充分析出。本发明具有使用安全，操作简便，制造成本低廉的优点。本发明用于直接对血清、血浆或全血标本中乙肝病毒DNA的释放，无需加热，无需离心，只需一步加样，即可完成DNA的释放和提取。本发明实现了乙肝病毒核酸提取与扩增-荧光PCR定量检测的一步法操作，从根本上解决了多步核酸提取法带来的核酸丢失和污染问题。

附图说明

图1为HBV-DNA定量参考品1(1x10⁷IU/ml)、2(1x10⁶IU/ml)，3(1x10⁵IU/ml)、4(1x10⁴IU/ml)的扩增曲线图；

图2为HBV-DNA的定量参考品的标准曲线图；

图3为本发明测试的HBV-DNA浓度为1.3x10⁶的测试的10个反应的扩增曲线图；

图4为本发明测试的10例临床HBV阳性样本的扩增曲线图。

具体实施方式