[发明专利]一种生物法制备L-半胱氨酸的方法

权利要求书

1.一株恶臭假单胞菌株HW-3，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其菌种保藏编号为CGMCC No. 15553 。

2.权利要求1所述的恶臭假单胞菌株HW-3在制备制备L-半胱氨酸中的应用。

3.根据权利要求1所述的恶臭假单胞菌株HW-3制备L-半胱氨酸的方法，其特征在于，以DL-2-氨基-△2-噻唑啉-4-羧酸为原料，以经发酵培养获得的HW-3菌体作为催化剂，于pH6.0-8.5，20-40 ℃进行生物转化，最终获得产物L-半胱氨酸。

4.根据权利要求1所述的恶臭假单胞菌株HW-3制备L-半胱氨酸的方法，其特征在于，包括以下步骤：

第一步：发酵种子液的制备：

将HW-3接种到种子培养基中，摇床转速为100-200 rpm，20-45℃条件下培养15-60 h，获得发酵种子液；

第二步：菌体发酵及生物转化：

将发酵种子液以1-8%的接种量接种到发酵培养基中，培养条件为：摇床转速为100-200rpm，20-45℃条件下培养15-60 h；

发酵结束后，向发酵液中加入0.05-3.5 %的渗透剂氯仿，在10-50℃下处理0.2-4.0 h，制备透性细胞；

透性细胞制备过程可以在摇瓶进行，也可以在发酵罐进行，为增加菌体与渗透剂的接触，增强处理效果，处理过程要进行震荡或搅拌；

在摇瓶制备透性细胞时，将其置于摇床内震荡处理，摇床转速60-200 rpm；在发酵罐制备透性细胞时，开启搅拌，搅拌转速为100-300 rpm；

在三角瓶或发酵罐中，以透性细胞为生物催化剂，加入终浓度为0.05-3.0 g/L的DL-ATC后于20-60 ℃下恒温发酵转化5-40 h。

5.根据权利要求4所述的恶臭假单胞菌株HW-3制备L-半胱氨酸的方法，其特征在于，所述种子培养基组成成分为：麦芽糖1.0-30.0 g/L，DL-ATC 0.1-3.0 g/L，氯化铵0.2-2.0 g/L，氯化镁0.05-0.4 g/L，氯化亚铁0.05-0.5 g/L，酵母浸膏0.2-10.0 g/L，牛骨蛋白胨2-20.0 g/L，磷酸氢二钠0.2-2.0 g/L，氯化钠0.1-1.2 g/L，溶剂为水。

6.根据权利要求4所述的恶臭假单胞菌株HW-3制备L-半胱氨酸的方法，其特征在于，所述发酵培养基组成成分为：麦芽糖1.0-30.0 g/L，DL-ATC 0.1-3.0 g/L，糖蜜0.2-2.0 g/L，氯化镁0.05-0.4 g/L，氯化亚铁0.05-0.5 g/L，硫酸铵1.0-10.0 g/L，磷酸氢二钠0.1-2.0g/L，氯化钠0.1-1.2 g/L，氯化锰0.02-0.2 g/L，溶剂为水。