[发明专利]一种提取收集活细胞用的细胞缓冲液及其配制方法

权利要求书

1.一种提取收集活细胞用的细胞缓冲液及其配制方法(以下简称细胞缓冲液)，由缓冲体系、蛋白质替代物和细胞基本营养成分组成，其特征在于：

所述缓冲体系由基本无机盐和缓冲剂HEPES(4-羟乙基哌嗪乙磺酸，(4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazineethanesulfonic acid)组成；

所述蛋白质替代物由聚乙烯醇(Polyvinyl Alcohol，简称PVA)和非必需氨基酸组成；

所述细胞基本营养成分由乳酸钠、丙酮酸钠和葡萄糖组成。

2.根据权利要求1中所述的一种细胞缓冲液，其特征在于：所述基本无机盐包括氯化钠、氯化钾、磷酸二氢钾、氯化钙、硫酸镁、碳酸氢钠。

3.根据权利要求2所述的一种细胞缓冲液，其特征在于，所述基本无机盐包括：

氯化钠 90～110毫摩尔；

氯化钾 4～5毫摩尔；

磷酸二氢钾 0.3～0.5毫摩尔；

氯化钙 1.5～2.5毫摩尔；

硫酸镁 0.15～0.25毫摩尔；

碳酸氢钠 2～6毫摩尔；

Na⁺/K⁺比例是21～23；

Ca⁺⁺/Mg⁺⁺比例是9.5～11。

4.根据权利要求1～3中所述的一种细胞缓冲液，其特征在于：所述缓冲体系的HEPES，其作用是维持细胞缓冲液的酸碱度(pH值)，能用于空气环境，不适用于富CO₂的环境(如CO₂培养箱)。

5.根据权利要求4所述的一种细胞缓冲液，其特征在于：所述缓冲体系的HEPES的浓度为15～30毫摩尔。

6.根据权利要求1中所述的一种细胞缓冲液，其特征在于：所述蛋白质替代物中的PVA，用于维持细胞缓冲液的渗透压，发挥血清白蛋白的作用，保持细胞形态学及生物学特性。

7.根据权利要求6所述的一种细胞缓冲液，其特征在于：每毫升细胞缓冲液含有0.1～0.3毫克PVA。

8.根据权利要求1中所述的一种细胞缓冲液，其特征在于：所述蛋白质替代物中含有7种非必需氨基酸(如表1)。

表1 细胞缓冲液中非必需氨基酸的浓度

9.根据权利要求1中所述的一种细胞缓冲液，其特征在于：所述细胞基本营养成分包括乳酸钠、丙酮酸钠和葡萄糖。

10.根据权利要求9所述的一种细胞缓冲液，其特征在于：所述乳酸钠的浓度为18～25毫摩尔。

11.根据权利要求9所述的一种细胞缓冲液，其特征在于：所述丙酮酸钠的浓度为0.30～0.50毫摩尔。

12.根据权利要求9所述的一种细胞缓冲液，其特征在于：所述葡萄糖的浓度为0.15～0.25毫摩尔。

13.根据权利要求5所述的HEPES配制方法，其特征在于：

1)先配制0.154摩尔的HEPES母液，方法是(以配制100毫升为例)：

a)取6.2毫升1摩尔的氢氧化钠，加入65毫升MilliQ超净水；

b)称取3.67克HEPES加入至上液，混合，标准室温下(25℃)混摇均匀至完全溶解；

c)用1摩尔的氢氧化钠滴定，调节pH值至7.4；

d)加入MilliQ水至总量100毫升，储存于4℃，有效期为一个月；

2)然后配制细胞缓冲液，工作浓度为15～30毫摩尔。

14.根据权利要求7所述的PVA配制方法，其特征在于：

1)先配制5毫克/毫升的母液，方法是(以配制50毫升为例)：称取250克PVA加MilliQ水至50毫升，温和加热至80～90℃，混摇均匀至完全溶解；

2)然后配成细胞缓冲液，工作浓度为0.1～0.3毫克/毫升。