[发明专利]评估替莫唑胺在治疗脑胶质瘤患者的敏感性的新方法

说明书

本发明涉及评估替莫唑胺在治疗脑胶质瘤患者的敏感性的新方法，采用多种基因标记物对化疗药物进行敏感性评估，包括以下步骤：测定样本的基因标记物状态；根据基因标记物状态参数实现样本对替莫唑胺的敏感性进行评估。本发明提供了引物组和试剂在基因标记物的甲基化情况，相对表达量的联合判别方法中的应用。通过上述方法计算的结果，可以更好的对脑胶质瘤治疗中替莫唑胺的敏感性进行评估。

技术领域

本发明属于脑胶质瘤治疗与诊断技术领域，特别涉及一种用于对脑胶质瘤替莫唑胺治疗效果和敏感性评估的联合基因标志物，以及检测该联合标记物的检测试剂盒和敏感性评估标准。

背景技术

脑胶质瘤是最常见的神经系统恶性肿瘤，简单的分为四个级别。WHO I的良性肿瘤，WHO II为低度恶性，WHO III和IV级为高度恶性。胶质瘤呈浸润性生长，恶性程度高、患者预后差。其中WHO IV胶质母细胞瘤是胶质瘤中最恶的一种，它的中位生存时间仅14.6个月。目前脑胶质瘤的标准治疗是手术(在保护功能的情况下，尽量全切)和同步放化疗和辅助化疗。替莫唑胺(TMZ)是目前最常用的烷化剂的化疗药物。

TMZ是一种新型的口服二代烷化剂咪唑四嗪类衍生物(分子量为194.15)。TMZ作为前体药物，不需要经过肝脏代谢，在生理pH值条件下，经非酶催化快速转变为活性化合物5-(3-甲基三嗪-1-基)咪唑-4-酰胺(MTIC)，然后进一步分解为5-氨基-咪唑-4-酰胺(AIC)与重氮甲烷。TMZ是通过损伤肿瘤细胞的DNA，来杀死肿瘤。TMZ引起的DNA损伤主要发生在鸟嘌呤的O⁶和N⁷，以及腺嘌呤的N³位置上。因为在DNA复制过程中，错配修复系统虽能识别错误配对的碱基对，但不能为第6位氧原子甲基鸟嘌呤找到配对碱基，因此子链DNA有缺口形成，缺口随细胞分裂而逐渐积累，最终阻碍细胞复制启动，从而使细胞周期停滞在G₂-M期发生细胞死亡；还可使细胞DNA的单链或双链断裂，阻断DNA的复制而抑制肿瘤生长。

TMZ在恶性脑胶质瘤的治疗中已经得到了广泛的认可和应用，但肿瘤对药物的敏感性是影响化疗效果的重要因素之一。其中，DNA修复酶——O⁶-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶(O⁶-methylguanine-DNA methyltransferase，MGMT)在胶质瘤组织中的表达与肿瘤对TMZ的敏感性相关，其机制为，MGMT是唯一能将O⁶鸟嘌呤复合物从DNA上移除的蛋白，可在突变前中和这种损伤作用。MGMT主要通过不可逆地将烷化基团从O⁶-mG转移到MGMT蛋白145位的半胱氨酸残基上，而保护细胞免受TMZ的损伤。在这一过程中，MGMT不需要辅助因子和其它蛋白质的参与，同一蛋白即作为甲基转移酶，又作为甲基受体蛋白。同时，MGMT蛋白反应位点被烷化基团不可逆结合而失活，故该反应又称自杀反应。细胞对于DNA鸟嘌呤O⁶上烷化基团的修复能力取决于MGMT在细胞内的含量，而MGMT基因启动区的甲基化状态是决定MGMT表达的主要因素。因此，检测MGMT基因启动区甲基化情况，已经作为临床上评价脑胶质瘤患者对TMZ药物敏感性主要手段。