[发明专利]一种酶法转化制备DL-半胱氨酸的方法在审
| 申请号： | 201810442618.1 | 申请日： | 2018-05-10 |
| 公开（公告）号： | CN108342425A | 公开（公告）日： | 2018-07-31 |
| 发明（设计）人： | 焦庆才;刘均忠;吴婷;曹双燕;余进海 | 申请（专利权）人： | 南京大学 |
| 主分类号： | C12P13/12 | 分类号： | C12P13/12;C12R1/64;C12R1/40;C12R1/19 |
| 代理公司： | 南京知识律师事务所 32207 | 代理人： | 胡锡瑜 |
| 地址： | 210023 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 半胱氨酸 酶法转化 制备 大规模工业化生产 生物技术领域 生产成本低 分离提取 来源问题 酶法合成 酶偶联 丝氨酸 催化 转化 | ||
【权利要求书】：
1.一种酶法转化制备DL-半胱氨酸的方法，其特征由以下步骤构成：
(1)将黄单胞菌来源具有D-苏氨酸醛缩酶活性的菌株、恶臭假单胞菌来源具有氨基酸消旋酶活性的菌株、大肠杆菌来源具有色氨酸合成酶活性的菌株分别在培养基中培养，分别产生高活性的D-苏氨酸醛缩酶、氨基酸消旋酶、色氨酸合成酶；培养基碳源采用葡萄糖、麦芽糖、蔗糖和/或乳糖，培养基中总碳源质量浓度为1～20g/L；氮源采用牛肉膏、酵母膏、玉米浆、蛋白胨和/或豆饼水解液，培养基中总氮源质量浓度为1～20g/L；
(2)以50～180g/L的甘氨酸为底物，加入具有D-苏氨酸醛缩酶活性的菌体细胞或酶粗提液，0.05～0.5g/L的磷酸吡哆醛，20～40℃，流加100～370g/L的甲醛水溶液，用氢氧化钠水溶液控制pH 6～9，酶促转化得到D-丝氨酸；
(3)D-丝氨酸转化液经离心去除菌体细胞，加入硫氢化钠，pH 7～10，30～50℃，加入氨基酸消旋酶菌体细胞或粗酶液、色氨酸合成酶菌体细胞或粗酶液，双酶偶联催化合成DL-半胱氨酸；
(4)将生成的DL-半胱氨酸通空气或滴加双氧水氧化，等电点结晶法分离得到DL-胱氨酸，再经电解还原制得DL-半胱氨酸。
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